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文献综述
1.引言1.1 谷氨酸棒杆菌简介谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)是一种从土壤中分离得到的兼性厌氧的工程模式菌,被广泛地用于生产氨基酸、核苷酸等有机物质的合成,在医药、食品、农业等领域都有应用。
随着微生物学与分子生物学的发展,研究人员对谷氨酸棒杆菌中的基因工程改造的研究日益深入,并开发了很多的基因操作技术,成功地将技术应用于基因的分析及盛产菌株的构建。
本课题将针对谷氨酸棒杆菌开发碱基编辑技术,在现有基因编辑基础上进一步作出改进和探索,以期利用该技术获得更多新型高效的生产菌株,更好的应用于工业化生产。
1.2 基因组编辑技术发展简介基因组编辑技术是指对特定的基因进行精确敲除、插入或修饰的基因工程技术。
基因组编辑技术的发展大致可以分为三个阶段:第一代基因组编辑技术利用归巢核酸内切酶(meganuclease, MN)切割DNA双链,并利用同源重组进行基因组编辑。
该技术具有可切割位点少的缺点[1,2]。
第二代基因组编辑技术包括锌指核酸酶技术(zinc-finger nuclease, ZFN)[3]和转录激活因子样效应物核酸酶技术(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)[4]。
ZFN和TALEN制备复杂,且使用过程中易受影响,故应用受到限制。
第三代基因组编辑技术即CRISPR/Cas,该技术可以精准地用于改变目的DNA,具有操作便捷、简单高效等优势,已发展为最流行的基因编辑方法。
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