西番莲内参基因筛选前景
摘要：西番莲Passiflora coerulea又名百香果、热情果、巴西果,是西番莲科西番莲属的木质藤本植物,原产于南美洲巴西至阿根廷一带,现广泛种植于热带和亚热带地区。西番莲果汁是一种新型纯天然高级饮料,以其自身的鲜艳色泽,独特而强烈的芳香风味和丰富的营养,在国际市场上被誉为“饮料之王”。除此之外，西番莲还具有显著的药用和观赏价值。基因表达分析是了解复杂生物学过程、代谢途径及变异分子机理的重要途径。实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)是确定基因表达水平的最常用方法，利用qRT-PCR方法计算基因相对表达量时,通常需引入一个表达较为稳定的管家基因作为内参基因(reference gene)[1]。而稳定的内参基因作为模板丰度的参照在很大程度上影响到基因表达的准确度。国内外对西番莲的研究多集中栽培技术，罕见其分子层面相关报道，西番莲内参基因迄今尚未得到验证。本文从介绍西番莲的研究价值和实时荧光定量PCR方法对目的基因的研究意义以及内参基因对实时荧光定量PCR结果的研究影响三个方面入手综述西番莲内参基因筛选前景。
关键词：西番莲；实时荧光定量；内参基因筛选
1.1 西番莲概述
西番莲(Passiflora coerulea)是西番莲科西番莲属植物, 多为草质或木质藤本, 稀为灌木或小乔木，原产于南美洲，现广泛种植于热带和亚热带地区，巴西、厄瓜多尔、秘鲁、泰国、马来西亚和印度尼西亚等国家为主产区[2]。1988年引进到我国广西钦州等地，之后在广东、海南、福建、云南、台湾、江西、四川和贵州等地均有栽培[3]，其商业化品种主要有紫果、黄果、黄果与紫果杂交品种等3大类，其中紫果品种在我国栽培面积最大。西番莲果实可散发出香蕉、菠萝、柠檬等十多种水果的浓郁香味，可作水果鲜食，营养价值高，还可以加工浆果、果汁、饮料以及口服液等，口感好，甜味适中，香味浓郁，有“果汁之王”的美称；富含VC等多种维生素、矿物质元素、人体必需氨基酸及具有药用价值的生物碱和黄酮类物质；具有生津止渴、消除疲劳、养颜美容、抑菌抗癌、降胆固醇等多种保健疗效[4]。其种籽含油量达25%，油脂可与葵花油媲美，适于作食用油。果皮可加工饲料及提取果胶，根、茎、叶均可入药，有消炎、止痛、活血强身、滋阴补肾、降脂降压等疗效。另外，西番莲的花形奇特，色彩鲜艳，栽培容易，为庭园中布置花墙、花篱的理想植物。西番莲生理生化方面相关研究屡见不鲜，但其分子生物学研究甚少。
1.2 实时荧光定量PCR技术
对目的基因进行特异而准确的定量分析是目前分子生物学研究的热点之一，量化基因表达水平对研究复杂的分子调控机制非常重要。聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction, PCR) 为基因定量表达提供了快速而灵敏的途径, 但其只能通过凝胶电泳检测扩增的终产物来进行分析，定量的准确性受到影响。实时荧光定量PCR技术是在PCR基础上发展起来的，将核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测等技术融合在一起的一项创造性技术[5]。相比于常规基因表达量化的方法[6]，比如RNA印迹（Norther Blot），核酸核糖酶保护分析，原位杂交和半定量RT-PCR，实时荧光定量PCR [7]是一种新的定量核酸的技术。
实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性强、重复性好及高通量等特点 [8]，已经成为植物科学领域中进行基因组研究的常用技术之一。利用该技术可进行基因表达和转录组分析等[9]。然而，在其分析过程中，RNA的质量和产量、反转录效率的差异以及其它阻碍因素、内参基因的选择等都会对目的基因表达分析结果的准确性产生影响[7]。
1.3 内参基因的稳定性
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