大黄酸干预内质网应激诱导L02细胞损伤的作用及其机制研究文献综述

1.选题的目的和意义：

大黄酸是配制保健品的最佳原料，可降脂减肥、通便排毒，清洁内环境，预防胃癌，延缓衰老。目前国内已有单体大黄酸作为一类新药已被国家科技部列为“十五”国家重大科技专项，旨在确证临床疗效、体内和体外活性。对于该药安全性的研究亦势在必行，本研究从细胞水平初步探讨大黄酸是否能够在体外诱导正常肝细胞L02凋亡，其凋亡机制是否与内质网应激通路相关，以期明确大黄酸对肝脏的毒性及其毒性机制，对于大黄酸的进一步开发和临床应用具有重要的指导意义。

1. 国内外研究现状（文献综述）：

何首乌是临床常用的一味中药，性微温、味甘，归心、肝、肾经，具补肝益肾、养血养精的功效，用于治疗血虚头晕、肝肾阴虚、须发早白、筋骨酸痛、腰膝酸软、梦遗滑精、肢体麻木、失眠、崩漏带下、久痢等症^[1]。然而是药三分毒，近年来，不断有服用何首乌引起肝损伤的报道。有的用过首乌染发剂、有治疗脱发的中成药（含何首乌）、有喝含何首乌降脂茶的等等，均是在用药2周左右出现乏力、恶心、食欲不振或伴有尿黄、眼睛巩膜黄染。这种由药物引起的急性药物肝损伤，如不及时治疗，有的发展为重症肝炎，甚至危及生命。何首乌有毒成分主要为大黄酸、大黄素等葱酿类衍生物，实验显示何首乌可能具有肝脏毒性作用，孙向红等研究发现其中的大黄酸、大黄素是何首乌引发不良反应—肝毒性的主要成分，在高浓度、长时间作用下有细胞毒作用。

大黄酸（Rhein, 4,5-dihydroxyanthraquinone-2-carboxylic acid，简称RH）属单蒽核类1,8-二羟基蒽醌衍生物，是大黄、何首乌等多种中药药理成分蒽醌类化合物的重要组成部分，具有电化学氧化还原性质。以往的药理学研究证明，大黄酸在调节肾功能、抗肿瘤、抗菌消炎、降糖调脂、保肝、泻下等多方面具有活性^[2]，尤其在治疗糖尿病肾病、抗肿瘤方面表现更加突出，成为近年来研究的热点。然而，随着研究的不断深入，实验显示大黄酸可能具有肝脏毒性作用，王建平等研究表明高剂量的大黄蒽醌成分可显著升高小鼠的AST、ALT等，产生肝毒性。另一方面，立陶宛学者Daiva Bironaite在体外将大黄酸单体作用于雄性大鼠原代肝细胞，引起肝细胞凋亡。但大黄酸产生肝毒性的剂量及机制尚未明确，内质网应激是细胞凋亡的重要途径，许多肝脏疾病的发生与内质网应激介导的细胞凋亡有关，甄永占等研究发现赖氨大黄酸可激活JNK从而诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡^[3]，TE-CHUN HSIA和WAN-WEN LAI等学者将大黄酸作用于A-549和SCC-4细胞上均能通过内质网途径诱导细胞凋亡。种种迹象表明，其大黄酸造成肝损伤的机制可能与大黄酸引起内质网应激诱导肝细胞发生炎症损伤与凋亡有关。

3.选题研究的内容：

该论题研究的内容主要是大黄酸干预内质网应激诱导L02细胞损伤的作用及其机制,主要分为以下几个方面：

1. 测定大黄酸对L02细胞的毒性作用，并检测细胞凋亡情况
2. 检测大黄酸作用后L02细胞内Ca² 浓度
3. 测定内质网应激相关基因转录情况
4. 测定内质网应激诱导凋亡通路相关蛋白表达水平

4.选题研究的技术路线、研究方法和要解决的主要问题：

研究技术路线：首先，了解本论题的研究状况，形成文献综述和开题报告。其次，进一步搜集阅读资料并研读文献，寻求适宜方法，做好相关的记录。第三，开展实验，深入研究，写成初稿。最后，反复修改，完成定稿。

研究方法：应用不同浓度大黄酸作用于体外培养的L02细胞不同时间,MTT方法观察药物对细胞生长抑制作用；流式细胞术检测细胞凋亡；Fluo-3 AM荧光探针检测Ca² ；RT-PCR、western blot分析其凋亡机制。

要解决的关键问题：大黄酸是否能够在体外诱导正常肝细胞L02凋亡，其凋亡机制是否与内质网应激通路相关。

5.研究与写作计划：

2015年3月8日——4月1日 确定选题、收集相关资料
2015年4月2日——4月16日 撰写开题报告与开题

2015年4月17日——4月30日 收集资料，开展研究，形成写作提纲

2015年5月1日——5月28日 深入研究，形成论文初稿

2015年5月29日——6月5日 论文修改、定稿、打印、答辩

6、参考文献：

[1]管淑玉,苏薇薇. 何首乌的化学成分和药理作用研究进展[J]. 中学,2008,6(4):454-455.

[2]李晓红, 李蒙, 陶艳蓉. 大黄酸及其衍生物药理作用研究新进展[J]. 现代药物与临床, 2010, 25(6): 417-421.

[3] 甄永占,林雅军,骆广玲,赵毓芳,高俊玲. 赖氨大黄酸通过激活JNK诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡[J]. 基础医学与临床,2011,31(1):68-72.

7.指导教师意见：

签名：

年 月 日

8.开题审查小组意见：

教研室主任或组长签名：

年 月 日