开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 研究背景
积雪草是伞形科积雪草属植物积雪草的干燥全草，味苦、辛，性寒，有清热解毒、止血消肿和利水利湿的功效，可用于治疗跌打损伤、疔疮肿毒、蛇虫咬伤等。积雪草苷是积雪草的主要成分，研究历史较长，与积雪草的大多数药理作用密切相关。积雪草苷属于五环三萜类，结构为乌苏烷型，其苷元为积雪草酸，糖类部分包括一分子葡萄糖和一分子鼠李糖。目前积雪草苷在临床已经广泛运用，多用于治疗皮肤损伤、促进创口愈合。大量的研究也表明，积雪草苷除了能促进皮肤创伤愈合、修复损伤外，还具有抗抑郁和老年痴呆、保护中枢神经、减轻炎症反应、抗肿瘤、调节免疫等药理作用。其中，积雪草苷及其苷元积雪草酸的抗肿瘤作用是近年来的研究热点，特别是在其作用机制方面，已有不少研究报导了积雪草苷（酸）作用于肿瘤细胞的可能靶点并分析了相关潜在机制。
炎症反应是机体受到刺激时的一种防御表现，主要特征包括炎性细胞浸润和炎性因子的释放。巨噬细胞能够直接分泌相关细胞因子和趋化因子，在炎症微环境中发挥着关键作用。在不同的微环境下，巨噬细胞可以极化，转变为具有不同功能的不同表型。M1型巨噬细胞具有高抗原递呈、释放促炎细胞因子和促进原始T淋巴细胞分化成可产生促炎细胞因子的Th1的能力。而M2型巨噬细胞可持续释放抗炎细胞因子，如IL-4和IL-10，消除炎症，帮助组织进行修复和再生。由此可见，如可以通过药物影响到巨噬细胞的极化，使其在炎症区域尽可能多地表现为帮助抗炎的M2型，减少释放促炎因子的M1型的表达，将有利于炎症反应的消除。
- 研究目的
研究积雪草苷对巨噬细胞表型转化的影响，并探索其可能的作用机制。
- 研究方法
为验证积雪草苷对巨噬细胞表型转化的影响，本研究将从体外和体内两个方面分别进行实验。M1型巨噬细胞标记基因相应的细胞因子主要有白细胞介素类的IL-1beta;、IL-6、IL-12与IL-18，一氧化氮合酶（INOS）和肿瘤坏死因子-alpha;（TNF-alpha;）；M2型巨噬细胞则是IL-4、IL-10、CD206、VEGF、KLF4和TGF－beta;1。体外试验将以这些标记基因的表达作为检测指标，通过qPCR检测相关基因的表达，来反映不同条件下不同表型的巨噬细胞的水平。
常用的动物炎症模型建立方法较多，皮肤创伤方式建立模型方便快速，外敷等给药方式也便于操作。体内模型采用表皮切除方式形成创面，通过外敷给药。但考虑到积雪草苷的水溶性不佳，如需配置成一定浓度的药液，需要使用特定量的DMSO进行增溶。如以此方式配置药液做成外敷敷料给药，需要验证增溶所用DMSO的量对细胞是否存在毒性影响。由于M1型巨噬细胞呈CD86高表达，而M2型巨噬细胞呈现CD163高表达，可以利用免疫组织化学染色的方式将巨噬细胞标记出来，进而通过显微镜计数。动物试验将采用前述方法造模，对照组和实验组的创伤组织切片经免疫组化染色后观察来评价积雪草苷对巨噬细胞表型转化的影响。
- 文献综述：积雪草苷抗肿瘤作用机制
积雪草苷是以五环三萜为骨架的苷，其苷元为积雪草酸。积雪草苷的糖苷键较不稳定，可在酸、碱或微生物作用下断裂，释放出苷元草酸。已有研究发现，肠道内的一些微生物能够将积雪草苷水解为积雪草酸，体外试验数据发现，三萜酸形式的抗肿瘤活性较皂苷形式更高。有观点认为，积雪草苷的抗肿瘤活性可能和五环三萜部分结构相关。根据多年来的研究，已发现积雪草苷（酸）对抗肝癌、乳腺癌、神经胶质瘤、皮肤癌等拥有理想的抗癌效果。积雪草苷抗肿瘤机制主要集中在以下几个方面：抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡、阻滞肿瘤细胞周期、抑制肿瘤血管的生成、抗肿瘤转移、辅助化疗药物增强抗肿瘤作用。研究表明，积雪草苷抗肿瘤的作用常常是多靶点、综合化的，能够从多个角度对肿瘤起到抑制作用。
4.1 抑制肿瘤细胞增殖
肿瘤细胞具有无限增殖生长、凋亡不受调控的特点，从而能够不断释放毒素，破坏正常组织。因此癌症治疗中的重点之一就是有效地抑制癌细胞的增殖。积雪草苷（酸）可对多种肿瘤细胞的生长增殖产生抑制作用，Yoshida等将积雪草提取物分离后，对人胃腺癌（MK-1）、人子宫癌（HeLa）和小鼠黑色素瘤（B16F10）细胞分别进行抗增殖活性研究，结果表明，积雪草酸对这三种肿瘤细胞的增殖均有较好的抑制活性（GI50：MK-1 40mu;M；HeLa 34mu;M；B16F10 34mu;M）。Zhang等研究发现，积雪草苷对大鼠脑部胶质瘤C6细胞的增殖有明显的抑制作用。增殖细胞核抗原PCNA水平能有效反应细胞增殖情况，且对细胞增殖的起始有重要作用，而CD40则和肿瘤多个发病机制密切相关。免疫组化分析显示，使用积雪草苷后PCNA和CD40的表达均显著减少，肿瘤生长减缓，起到良好的抗增殖作用。Bunpo等发现，对于氧化偶氮甲烷诱导生成的变体小囊病灶，一次性给予积雪草苷可显著减少小鼠小肠腺癌新生细胞发病率，新生肿瘤尺寸亦明显减小。此外，还有研究发现积雪草苷还能抑制肿瘤部位细胞DNA的合成来减缓增殖、抑制癌变。Sampson等证实，积雪草苷对体内外的肿瘤增殖都能表现较好的抑制作用，小鼠体内实验的数据显示，积雪草苷能通过抑制DNA合成来减缓肿瘤生长、延长生存期，并不影响正常淋巴细胞水平。
4.2 诱导细胞凋亡
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