降糖乳酸菌研究文献综述

 2022-12-25 11:15:31

拟研究解决的问题：

在大鼠体内验证筛选出的两株乳酸菌的降糖效果和G3PP酶通路的影响，以及对体内LPS含量的影响机制。

研究内容及手段：

通过评价模型的建立，成功筛选得到2-3株降糖乳酸菌；确定乳酸菌及代谢产物能在细胞水平上影响其G3PP酶活；阐明乳酸菌通过G3PP调控糖脂代谢具体机制

前期已完成的工作：

  1. 降糖乳酸菌的分离纯化，鉴定及评价模型的建立。从传统酸奶样品中分离得到实验乳酸菌，经过分子鉴定确定其种属，初筛得到候选菌株，以 LGG作为阳性对照菌株，测试菌株的益生指数，抗氧化指数、抗糖尿病指数为一级指标构建评价体系，建立筛选模型，运用主成分分析法和层次分离法相结合得到最终的降糖乳酸菌。
  2. 细胞水平上验证降糖乳酸菌对G3PP酶的影响。以HepG2和INS-1细胞为研究对象，阳性药物二甲双胍为对照组验证降糖乳酸菌对G3PP酶活的影响。

目前及接下来的工作：

  1. 降糖乳酸菌调控2型糖尿病大鼠糖脂代谢的变化利用高脂饲料喂养及链脲霉素注射对大鼠进行Ⅱ型糖尿病造模。普通饲料先适应性的喂养3天，记录初始体重。将大鼠随机分为两组，正常组（10只），高脂组（60只）。3天之后开始计算时间，正常组（10只）用普通饲料喂养，高脂组（60只）用高脂饲料喂养，喂养6周。六周之后全部用普通饲料喂养。在第6周结束第7周开始时，进行腹腔注射，正常组（10只）生理盐水，高脂组（60）注射链脲霉素（STZ 35mg/kg配置方式：STZ浓度为50mmol/L，将一定量STZ溶于50mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中（pH = 4.5），现配现用），测试空腹血糖和餐后血糖，将空腹血糖gt;7.0mmol/L;餐后血糖11.1mmol/L为造模成功标准。
  2. 将造模成功的大鼠随机分为5组，保证每组大于10只。第7周结束，第8周开始，以及处死前分别进行一次OGTT的测试，大鼠禁食不禁水12h后，检测血糖含量（0 min），随后大鼠灌胃葡萄糖溶液2g/kg后分别在30min，60min，和120min三个点分别检测血糖情况。从第6周开始，正常组和模型组灌胃生理盐水，而实验对照组灌胃120mg/kg二甲双胍，而实验组A,B,C分别灌胃A,B,C菌液
  3. 解剖大鼠后取相关组织脏器、血液、粪便等通过相应的生化指标测试，确定以评价体系筛选的降糖乳酸菌改善2型糖尿病大鼠的糖脂代谢，并在大鼠肝脏和胰岛组织上验证其对G3PP酶的影响。两次OGTT(葡萄糖耐受量）,空腹血糖，空腹胰岛素含量，计算胰岛素抵抗值这是在动物实验过程 中进行。主要是为了验证益生菌的灌胃降血糖效果。收集的大鼠粪便样品提取总DNA，菌群的多样性检测，总细菌数，G 和G-细菌数量。（主要的革兰氏阴性菌种），血清中的LPS含量。检测G /G-比例，验证乳酸菌是否的确会降低G-比例。用特定的肠型来分析高脂大鼠和益生菌治疗后大鼠的区别。肝脏组织提取总的RNA，反转录为cDNA，检测TLR2、TLR4、CD14、MyD88 mRNA相对表达情况。提WB试验检测TLR2、TLR4 、(IKKalpha;及IKKbeta;)蛋白表达情况，同时用ELISA试剂盒测试血清中的炎症细胞因子 TNF-alpha;、IL-Ibeta;、IL-6的含量。验证乳酸菌是否恶意通过抑制NF-kB途径进行系统组织炎症的缓解。

文献综述：

随着社会经济的发展，高脂高糖饮食的全球性蔓延导致肥胖、糖尿病等由人体糖脂代谢失调引起的疾病愈演愈烈，其发病人群、分布范围不断增加。据统计据统计，2017年中国的糖尿病患者高达1.14亿，占全球首位。2017年20到79岁之间的人中，大约有 400 万死于糖尿病。由于需要终生服药，糖尿病也是最大的用药领域之一。根据数据，我国约有1.14亿糖尿病患者，患病率高达11.6%，位居世界第一。最而新一次中国糖尿病横断面调查显示，截至 2013 年中国糖尿病患者知晓率及治疗率只有1/3，而控制率不足50%，仍处于较低的水平。

目前糖尿病已然成为了一种具有严重社会危害的疾病，针对糖尿病的治疗方式一般为手术和药物治疗，但口服降糖药对肝、肾等脏器损伤较大，且随着用药时间的延长，继发性失效和引起的肠胃不适等副作用也成为药物远期治疗效果的最大障碍，因此，寻找更天然、更安全有效的降糖途径已成为国内外研究热点。

糖脂代谢失调是糖尿病患者的关键性问题，而乳酸菌作为益生菌的代表，是一种安全有效降血糖的生物效应调节剂，在改善宿主微生态代谢平衡中具有重要作用，它作用温和、性质稳定、效果明显而持久，对有效防治糖尿病具有十分重要的理论价值和现实意义。

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