开题报告内容:
一、研究内容
固有免疫(innate immunity)是生物在长期进化中逐渐形成的,是机体抵御病原入侵的第一道防线,也称为非特异性免疫(non-specific immunity)。其识别免疫原虽然不像T细胞和B细胞那样具有高度的特异性,但可通过一类模式识别受体去识别病原微生物表达的称为病原体相关模式分子的结构。固有型免疫往往是适应性免疫的先决条件,适应性免疫应答的效应分子可大大促进固有免疫应答。
影响固有免疫的因素有许多,我们想探讨的就是AK1基因编码的蛋白对固有免疫有怎样的影响。我们的毕业设计任务就是:
1.目标基因的引物设计
2.分子克隆
3.构建目的基因的连接产物并表达,蛋白质的初步研究
分子克隆技术是本实验需要重点攻克的难题,它是在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。将目的基因用体外重组方法将它们插入克隆载体,获得连接产物,通过转化与转导的方式,引入适合的宿主体内得到复制与扩增,然后再从筛选的宿主细胞内分离提纯所需的克隆载体,可以得到插入DNA的许多拷贝,从而获得目的基因的扩增。
它包括PCR引物设计,以及PCR产物回收,酶切连接,质粒提取,大肠杆菌感受态转化等。很多环节会影响实验的成败,如酶切的好不好、回收的质量好坏、连接时的浓度或比例、感受态等。
二、研究方法与技术路线
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