一、课题来源
水蛭作为一位传统中药，因其活血化瘀的疗效在中国使用已有上千年的历史。20世纪初，欧洲科学家从水蛭唾液中提取出了水蛭素，水蛭素是一种天然的活性极强的凝血酶抑制剂，作为治疗各种血栓的药物已使用多年，随着1998年重组水蛭素的问市，水蛭素的生产更加规模化。但由于是在唾液中存在的，所以水蛭干燥药材中水蛭素的含量可想而知，但自古以来中药中使用的水蛭都是干药材，并取得良好的疗效。本课题就是为了提取出水蛭干药材中的活性物质，并与水蛭素进行对比。希望可以得到新型的具有抗凝活性的蛋白质，用于治疗各类血栓疾病。
二、课题基本内容
本实验室采用宽体金线蛭的干药材，研磨成粉，蒸馏水浸泡后酶解，有机溶解沉淀去除杂质，用凝血酶滴定法测定活性，发现得到了具有抗凝血酶作用的活性物质。本实验就是为了提取出纯的具有凝血酶抑制剂活性的此物质。我们假设其为蛋白质，暂时命名为水蛭多肽，设计一系列试验方法，通过不断地摸索条件，对水蛭多肽进行分离纯化。
实验室的前辈已通过实验摸索出合适的杂蛋白沉淀剂和可控酶解条件，本课题就是通过还原前辈的实验结果，通过工艺的优化来得到稳定的实验结果，积累样品，进一步通过大孔树脂、离子交换和凝胶层析分离得到纯的蛋白质，并用蛋白电泳或HPLC验证产品是否为纯品。若能得到性质均一的蛋白质，还需要测量蛋白质的分子量、等电点等理化性质，并测定蛋白质的序列，与已知的水蛭素的序列进行比对，判断是否是新物质。
三、文献综述
1、水蛭的抗凝活性
水蛭，俗名蚂蟥，在内陆淡水水域内生长繁殖，是我国传统的特种药用水生动物，其干制品炮制后中医入药，具有治疗中风、高血压、清瘀、闭经、跌打损伤等功效。近年新发现水蛭制剂在防治心脑血管疾病和抗癌方面具有特效。水蛭为杂食性动物，以吸食动物的血液或体液为主要生活方式。水蛭是一味传统中药，早在我国东汉时期的医药著作《神农本草经》就有用水蛭活血化瘀的记载：水蛭味咸平。主逐恶血瘀血、破血瘕积聚生池泽 [1]。 1884年，欧洲的John Haycraft博士发现欧洲医用水蛭会分泌出某种阻止血液凝结的物质以利于水蛭吸食血液消化，1955年，Markwardt等从医用水蛭中提取出水蛭素，共有7种异构体。因水蛭的来源有限，故国内外医药界均着重研究通过基因工程获得重组水蛭素。1986年后，重组水蛭素已在大肠杆菌和酶母中分别表达成功，1998年底重组水蛭素药物在德国正式上市，1999年英国批准上市，己注册的国家有美国、欧洲、澳大利亚、新西兰、南非等10多个国家[2]。广西医科大学毒蛇研究所的黄爱民等从广西菲牛蛭的消化液中提取出的菲牛蛭素A（BDA）和菲牛蛭素B（BDB）都对凝血酶表现出了极强的抑制作用。水蛭干药材中水蛭的唾液和消化液含量也极低[3]。然而中医上应用的往往是水蛭暴晒之后的干药材，从古时的记载和近期西安交通大学医学院史小莲等的实验结果来看，水蛭干药材也具有抗凝血作用[4]。但是这种抗凝血酶作用究竟是来源于何种物质，目前还不清楚，研究主要集中于国内。
2、血栓类疾病与抗血栓药物
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