一、研究背景，目的及意义
外泌体是细胞释放到胞外环境的囊泡，作为细胞信息传递的载体，参与多种病理生理过程。越来越多研究表明，肿瘤外泌体携带来源细胞特异性的蛋白、核酸等也可以作为肿瘤进展的生物标志物。而外泌体作为一种可分泌进入循环系统的特殊细胞因子，在肿瘤转移前、肿瘤进入循环系统以及肿瘤在靶器官定植都发挥着重要作用。外泌体通过重塑细胞外基质和建立转移前生态位，促进肿瘤细胞的转移和侵袭。因此可视化观测外泌体在肿瘤发展过程中的行为显得极其重要。
本研究旨在构建一种可分泌荧光标记外泌体的小鼠乳腺癌4T1细胞系，其原理是利用红色荧光蛋白RFP与外泌体标志性蛋白CD63融合，构建慢病毒表达载体，通过感染宿主细胞将融合蛋白基因整合到4T1细胞的基因组上，利用慢病毒载体的抗性基因筛选得到稳定表达融合蛋白的细胞株，最后用流式细胞术和荧光显微镜观察共同判定构建是否成功。为后期研究4T1肿瘤细胞的外泌体在体内定位和行为提供必要的研究工具。
二、拟解决的关键问题
1.利用酶切-酶连法构建小鼠CD63-RFP慢病毒载体
2.足量的慢病毒在293T细胞中包装释放
3.慢病毒感染后4T1细胞系的状态维持与筛选
三、研究思路及方法
1.构建CD63-RFP融合蛋白慢病毒表达载体
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