意义：柑橘属(Citrus L．)系芸香科(Rutaceae)柑橘亚科(Aurantinoideae)植物，是全球范围内具有重要经济价值的果树。我国是柑橘起源中心和遗传变异中心之一，无论是栽培品种，还是 野生、半野生品种以及自然和人工育成的杂种类型等遗传种质资源都极为丰富，同时也拥有大量近缘属植物。常能在柑橘表面发现大量结痂脓疱和疣状外观。
柳属（Salix）是全球生态系统中重要组分并为提高人类生活质量做出了巨大的贡献。世界范围内，约有330-500种柳树。中国被认为是柳树的起源地有着275种柳树。而在柳树叶片上出现灰褐色的斑点的现象也较为普遍，并未得到人们的普遍重视。
经过测序比较，引起柑橘赤霉病与柳树疮痂病的病原菌均为Elsinoeuml;属的真菌。因此通过在柳树疮痂病菌中建立crispr系统来研究Elsinoeuml;属真菌致病机理和植物毒素生物合成途径对于防治此属真菌侵害，降低果农损失，美化环境并提高人民生活质量具有重要的意义。
目的：现已知Elsinoeuml;属真菌产生致病作用的毒素Elsinochromes及其性质和致病机理，但对于Elsinochromes的合成基因簇仍不明确。现阶段通过在柳树疮痂病菌中建立crispr系统，敲除可能的与植物毒素合成相关的基因簇。接种培养后根据Elsinochromes的性质比较感染结果判断敲出的基因是否为毒素合成基因。
二、国内外同类研究概况
Elsinoeuml; murrayae（Sphaceloma murrayae）是感染salix属的一个重要的真菌病原菌。它会导致灰白色的叶片斑点，这种病变在全世界除了在中国都有报道。他的形态学特征已经有较为丰富的描述。但是却缺少有关这种真菌的分子信息。基于疾病症状，形态学描述和真菌的单命名规则，那些从salix属中被分离出的真菌被认为是Elsinoeuml; murrayae的新组合。结合内转录间隔区（ITS），大亚基（LSU），RBP2和TEF-alpha;DNA序列 的系统发育分析显示：Elsinoeuml; murrayae和Elsinoeuml; salicina（从寄主salix属里分离得到的Elsinoeuml;种）是可加以辩别的两个种。通过台盼蓝细胞染色和体式显微镜观察，发现在接种后的第两天，大规模细胞死亡。当分生孢子被接种至垂柳树叶后的第三天，轻微的疾病症状开始出现。致病性分析揭露了三个独立种可以成功的感染salix babylonica，salix faragilis和salix suchowensis的成熟树叶，但是却无作用于salix matsudana。此外，一个叫做EmNLP1的NLP基因被克隆出来了。EmNLP1的细胞毒素在烟草中通过瞬时化验被确认。在感染的过程中，EmNLP1在接种后的第二天引人注目的登顶，并在坏死性病变生长阶段保持一个高水平的表达。
引起柑桔疮痂病的真菌病原------Elsinoeuml; fawcettii和Elsinoeuml; australis。Elsinoeuml; Fawcettii和E.Australis是柑橘疮痂病的重要的病原菌。二者都可以产生红色或橙色的色素----Elsinochrome。Elsinochrome是一种非寄主选择性毒素，并且是完全真菌毒力和损伤形成所必需的。在结构上类似于植物毒素cercosporin。这儿的色素是从一种柑橘病原体----Elsinoeuml; fawcettii的培养物中提取出来的，并检测了细胞毒性。光照条件下，Elsinochromes对悬浮培养的柑桔和烟草细胞有快速杀灭作用。加入单线态氧淬火剂（双辛（类胡萝卜素羧酸），DABCO（1，4-二氮杂辛基辛烷），抗坏血酸或还原型谷胱甘肽降低了毒性。在粗糙的柠檬叶上应用Elsinochromes导致坏死性病变，而通过添加Bixin、DABCO或抗坏血酸来抑制病变的发生，而不是alpha;-tocopherol。在光照条件下，粗柠檬叶盘与Elsinochromes共同孵育，导致电解质渗漏量稳步增加。
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