开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
金黄色葡萄球菌外膜蛋白特异性单克隆抗体的制备及鉴定
摘要：为获得金黄色葡萄球菌特异性抗原蛋白并以此制备单克隆抗体，应用DNAStar、antheprot软件筛选金黄色葡萄球菌外膜特异性FnbpA、ClfA的抗原表位，将目的基因克隆到pGEX4T-2和pET-28a原核表达载体上，转化至大肠杆菌感受态细胞，诱导表达，采用亲和层析和螯合层析纯化表达蛋白，制备高纯度抗原后免疫小鼠，制备特异性单克隆抗体并鉴定。本课题旨在在已表达的金黄色葡萄球菌两种特异性外膜蛋白的基础上，完成单克隆抗体的制备及鉴定，结合免疫免疫磁珠进行现场快速检测，为后续建立金黄色葡萄球菌的检测方法奠定坚实的基础。
关键词：金黄色葡萄球菌、抗原表位、单克隆抗体
一、研究背景
金黄色葡萄球菌是一种重要的人兽共患病原菌，由其引起的食物中毒在世界各国极为普遍，是一种世界公认的导致人类和动物化脓性疾病的致病因子，也是引起食物性细菌中毒的重要因素。据美国疾病控制中心报告，有金黄色葡萄球菌引起的食物中毒仅次于大肠埃希菌，居第2位，占细菌性食物中毒的33%；加拿大的发生率更高，占细菌性食物中毒的45%。
金黄色葡萄球菌是导致奶牛乳房炎的主要致病菌，患乳房炎奶牛的乳汁中常含有大量的毒素、病原微生物及治疗后残留的抗生素，食用这种牛奶能引起呕吐、腹泻、发热和过敏等症状，从而严重危及人类健康。目前，农业部和卫生部采用的金黄色葡萄球菌检测方法为培养法，该方法耗时较长，对仪器设备的要求相对较高。
金黄色葡萄球菌感染首先开始于细菌对宿主细胞的粘附。金黄色葡萄球菌粘附素归于一个单独的群体，叫做微生物表面成分识别粘附基质分子。其中，FnbpA是纤连蛋白结合蛋白（Fnbp）的一种，是细菌表面的蛋白质成分，几乎所有的金黄色葡萄球菌都有纤连蛋白结合蛋白。聚集因子（CflA）在细菌生长的各个阶段都出现，且几乎存在于所有金黄色葡萄球菌表面，是金黄色葡萄球菌表面重要的粘附素，可介导金黄色葡萄球菌粘附到宿主基质蛋白上，这是金黄色葡萄球菌感染的重要一步。有人建立的多重PCR检测金黄色葡萄球菌粘附素基因的方法具有良好的特异性和可靠性，并且发现ClfA和FnbpA基因存在绝大部分的金黄色葡萄球菌中。
通过NCBI数据库对上述2种抗原的基因进行比对，结果表明这2种抗原蛋白皆为金黄色葡萄球菌所特有。
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