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文 献 综 述1.1 研究背景蔗糖磷酸化酶 (EC 2.4.1.7, sucrose phosphorylase, SPase) 是一种催化转移葡萄糖苷键的特异性酶, 属于糖基水解酶13家族[1]。
该酶由于其极性强、结构稳定、具有特殊的催化性能,在食品、化妆品及医药等行业中得到了广泛的应用[2],国内外市场对该酶的需求量较大。
目前关于蔗糖磷酸化酶蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中表达的研究国内少有报道。
国外,特别是在日本和韩国,对基因工程菌表达并产生SPase的研究较早,但在我国,大多数的研究仍停留在野生菌的筛选和产酶条件优化等方面。
我国由于产酶工艺成本偏高以及在分子水平上对该酶的缺乏了解和研究,目前该酶主要依赖于进口[3]。
1.2 蔗糖磷酸酶简介1.2.1 蔗糖磷酸酶的结构与催化特性不同菌株产生的蔗糖磷酸化酶的分子结构和催化特性不同,导致底物特异性差异较大[4]。
虽然会有不同的底物特异性差异,但该酶还是有两种主要的催化反应类型,即:(1)将1-磷酸葡萄糖中的葡萄糖基转移至相应受体;(2)将蔗糖水解并可转移葡萄糖基至相应受体,受体可以为水、无机磷酸、含酚羟基、醇羟基和羧基等物质[5],如以氢醌等为受体,可催化合成熊果苷。
KOGA T等人[6]从肠系膜明串珠菌( Leuconostoc mesenteroides )细胞中分离纯化蔗糖磷酸化酶,该酶经鉴定为一种分子量为55000的单体酸性蛋白,由488个氨基酸组成,pI = 4.6,氨基酸组成及N端氨基酸序列见附表。
经氨基酸序列分析,发现该酶能够特异性地催化转移葡萄糖苷键,与葡萄糖基转移酶A相似,但与嗜糖假单胞菌酶不同。
Desiree Sprogoe等人[7]曾解析出来源于Bifidobacterium adolescentis的蔗糖磷酸酶的蛋白结构,结果表明该酶为同型二聚体,并拥有4个结构域, 分别是A域、B域、B'域和C域。
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