保健食品枫斗快速鉴定的综述
石斛干品也称枫斗，铁皮石斛的干品叫铁皮枫斗。铁皮枫斗多糖含量高，具益胃生津，滋阴清热之功效，其中铁皮石斛是众多品种中药用价值最高的一种，价格也比其他石斛高出百倍，在制作成枫斗状态下，石斛外形、质地、气味和口感等方面有一定的差异，一般通过看、闻、拉、咀嚼等方式可以有所区分，但仍不能准确鉴定真实性。市场上许多用其他石斛制作的都号称是铁皮石斛，它们先是用木炭烤成八分熟，然后用手工制成，所以干品很难区分是铁皮石斛还是其他石斛。不法商家为了谋取暴利，经常出现以假乱真，以次充好的行为，造成了枫斗类保健品市场的混乱，而近年来，DNA分子标记技术得到了迅猛发展，可采用SSR标记法来为铁皮枫斗的原料铁皮石斛的DNA分子鉴别提供鉴别依据。
枫斗类保健品的开发应从其保健功能等方面开始研究。枫斗即石斛制成的干品。目前有3种石斛被开发成保健食品，它们分别是铁皮石斛、金钗石斛、霍山石斛。而由于铁皮石斛具有极高的药用价值，所以占据了大壁江山。其类型也是多种多样，颗粒、胶囊、含片、饮料、冲剂等。而金钗石斛和霍山石斛也仅仅限于含片和胶囊。[1]
1.枫斗的药用价值
枫斗的原材料，铁皮石斛为石斛之极品，因其表皮呈铁绿色而得此名，又名耳环石斛、铁皮兰、黑节草等，为兰科石斛属多年生草本植物，其药用价值极高，有“仙草 ”之美誉，乃中华九大仙草之首。[2]铁皮石斛是石斛属植物中的名贵品种，以其滋阴清热润燥的功效，在《中国药典》中占有一席之地，在治疗和日常保健中广泛应用，疗效肯定。随着人工栽培技术的日渐成熟，铁皮石斛资源匮乏的问题也逐步得到解决，药理作用机制、药效成分和分子生物学等方面的研究也有较多报道。
2.枫斗的功能
枫斗具有抗衰老、抗肿瘤、降低血糖和提高免疫等作用。对恶性肿瘤的辅助治疗，以及慢性胃炎、糖尿病、慢性咽炎和久病体虚免疫功能低下等方面都有广泛的应用。铁皮石斛富含石斛多糖、氨基酸、无机元素、石斛碱、黏液质、淀粉等，能扩张血管、降血压、降血糖、抑制脂质过氧化、促进胃液分泌和提高免疫力等，在日常生活中，常作为药品和保健食品应用[3]。
3.用于枫斗的分子标记技术
铁皮石斛与石斛属有些品种在形态特征上有相似性，利用传统的鉴别方法往往不易区分。SSＲ、ISSＲ、 ＲAPD、AFLP、等分子标记技术目前被广泛用于铁皮石斛不同野生居群、不同栽培群体的遗传多样性及亲缘关系的研究。采用 ＲAPD 技术进行基因组 DNA多态性分析，能从石斛属内 26 个种当中方便快捷地鉴别出铁皮石斛。采用ＲAPD和ISSＲ分析9个铁皮石斛自然居群，表明居群间的遗传差异明显，具有丰富的遗传多样性，并且ISSＲ的多样性检测优于ＲAPD。[4]
中药石斛的显微构造进行系统聚类分析，分析结果与药材性状及显微鉴定结果基本一致。DNA 分子标记技术具有遗传稳定、不受环境影响和检测迅速准确的优点，可以快速准确地鉴定一些外形很难区分的植物种群。[5] 目前，铁皮石斛的 DNA 分子鉴定主要采用RAPD、AFLP、ISSR、SRAP、SSR和 ITS等分子标记技术。[6]
4.SSR标记
简单重复序列( Simple sequence repeat，SSR) 标记技术，也称微卫星 DNA 标记技术。SSR的产生是在 DNA 复制或修复过程中姐妹染色单体不均等交换的结果。不同遗传材料核苷酸重复次数的可变性，导致了SSR长度的高度变异性，这一变异性正是 SSR标记产生的基础。 其通常做法是根据微卫星重复序列两端的特定短序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段。根据分离片段的大小决定基型并计算等位基因频率，通过其多态性进行遗传多样性鉴定。[7] SSR 标记技术是由 M oore 等 1991 年创立的, 其基本原理是根据微卫星重复序列两端的特定短序列设计引物, 通过 PCR 反应扩增微卫星片段。近年来, 微卫星标记已经成为比较理想的分子标记, 并且在石斛研究中也开始有所应用。[8] Yue 等 [12]从研究的 42 个商业石斛杂交品种中开发出了 14 个 SSR 多态性标记, 并将其用于石斛品种的鉴定, 结果显示, 这些 SSR 标记可以用于分子生态学研究。Gu等[13]从两个富含微卫星的文库中分离和鉴别出 12 个微卫星标记, 以乐业铁皮石斛居群的 22 个个体为研究对象, 研究发现这些标记具有多态性, 并且每个标记出现 3～ 12 个等位基因。[8]
2010年，谢明璐[9]等成功筛选了 4 对 SSR引物用于铁皮石斛组培苗的品种纯度鉴别。2006年，沈洁[10]等首次建立了可用于铁皮石斛 ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系。2011年，沈洁[10]等又结合 SSR和 ＲAPD 的优点，成功设计出 16 对引物组合，对铁皮石斛 9 个野生居群进行检测，表明铁皮石斛不同居群间存在较丰富的遗传多样性。[11]
SSR标记技术具有数量丰富、多态性高、共显性遗传、重复性好的特点，是检测 DNA 多态性的一种有效方法。
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