开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、研究的主要目的和意义
基因治疗（gene therapy）是指将外源正常基因导入靶细胞，纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，达到治疗目的[1]。
随着肿瘤基因治疗的研究深入，其临床应用逐渐增多，其中载体的选择是基因治疗的主要难题[2]。目前基因治疗主要是以一种称为噬菌体的病毒作为基因载体。虽然这种病毒载体具有很高的转染效率，但其本身存在细胞毒性、免疫原性、潜在致癌性、成本较高等缺点，使人们的研究逐渐转向非病毒载体。非病毒载体基因递送系统具有低毒性、无免疫原性、在体内稳定且易于生产的特点，因此，以此为基础的非病毒载体基因治疗是未来医药领域中极具潜力的发展方向[3]。
1.非病毒载体基因递送系统
1.1非病毒载体概述
非病毒基因载体作为外源基因的载体具有以下优越性：制备简单，无免疫原性，可被细胞生物膜利用；可运载不同大小的基因片段；甚至可以运载染色体或细胞核，其容量大大超过其他载体；可以抵御核酸酶的作用，延缓基因降解等作用[3]。非病毒载体虽然有以上优点，但基因转染效率仍然较低。不同载体介导基因转染的条件和效率不同。例如阳离子脂质体介导基因转染，需要考虑以下参数：①脂质成分； ②脂质体与DNA比例；③细胞融合度；④转染时间等。其中载体与DNA的不同比例对转染效率影响较大，其原因可能是不同脂质体的结构不同，所带的正电荷数也存在差异有关。细胞融合度对转染效率也有影响，在60%时转染效率最好[3]。
1.2非病毒载体类型
目前研究的较多的非病毒载体包括脂质体、阳离子聚合物、树状大分子、无机纳米材料等[4]。
- 脂质体拥有良好的生物相容性、制备过程简单，在递送基因药物方面具有明显优势。许多阳离子脂质体已被广泛应用并接近作为临床使用的基因载体之一。阳离子脂质体本身带正电荷，能与带负电的DNA通过静电作用机密结合，形成脂质体与DNA的复合物，可保护其不被核酶降解。然而脂质体并不是完美的基因递送载体：阳离子脂质体易与红细胞膜、血浆蛋白等血浆中带负电物质静电结合发生聚集；脂质体进入机体后可迅速被肝、脾等的巨噬细胞吞噬，从而降低药物在病灶部位的沉积。为解决这些问题经常在脂质体表面引入PEG，增加脂质体稳定性延长体循环时间。
脂质体基因递送系统在临床许多方面得到应用。在研究肿瘤疫苗方面，Philip等构建一种表达质粒pMP6-IL-2，用于研究脂质体介导转染能分泌IL-2的乳癌和卵巢癌细胞，以检验发生遗传学改变的肿瘤疫苗在临床上治疗乳癌和卵巢癌的可行性。用免疫染色法检测发现至少40%的肿瘤细胞表达了基因转移[3]。
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