文献综述
课题现状 以紫外分光光度计作为仪器分析的方法广泛应用于工农业各部门和科学研究的各个领域中，它是利用所测试物质分子吸收紫外可见光谱区辐射的一种常用的仪器分析方法。其基本原理是根据朗伯·比尔定律，即光照射时被透明介质吸收的比例与入射光强度无关，光的吸收与光程、溶液浓度、吸光系数成正比，可用下式表示：A=ktimes;btimes;c. （1）式（1）中：A 为吸光度；k 为摩尔吸光系数；b 为光程，即盛放溶液的液槽的透光厚度；c 为溶液浓度。金属螯合亲和层析也称固相化金属离子亲和层析, 该方法是利用蛋白质表面暴露的一些氨基酸残基和载体之上的金属离子之间的相互作用而进行的亲和纯化。金属螯合亲和层析(IMAC)具有配体简单、吸附量大 、分离条件温和 、通用性强等特点。由于该方法几乎对蛋白质本身的生物活性没有依赖,所以, 除了可以在常规的非变性条件下进行纯化外还特别适合分离纯化变性蛋白 ,尤其是带 6 个组氨酸标签的重组蛋白。广泛应用于大肠杆菌表达包涵体蛋白质的分离及纯化, 是分离纯化生物工程蛋白质产品最有效的工具之一 。金属螯合亲和层析也称固相化金属离子亲和层析, 该方法是利用蛋白质表面暴露的一些氨基酸残基和载体之上的金属离子之间的相互作用而进行的亲和纯化。金属螯合亲和层析具有配体简单、吸附量大 、分离条件温和 、通用性强等特点。由于该方法几乎对蛋白质本身的生物活性没有依赖,所以, 除了可以在常规的非变性条件下进行纯化外还特别适合分离纯化变性蛋白 ,尤其是带 6 个组氨酸标签的重组蛋白。广泛应用于大肠杆菌表达包涵体蛋白质的分离及纯化, 是分离纯化生物工程蛋白质产品最有效的工具之一 。课题背景
在蛋白类生物药生产过程中，为了时刻了解产品情况，监控产品中的蛋白浓度是最为主要的方式。测定蛋白质浓度的方法有很多，广泛使用的方法比如紫外吸收法，双缩脲法，BCA方法，Lowry法，考马斯亮蓝法，凯氏定氮法等等。本文所应用的原理即是UV法，又称紫外分光光度法，使用到的设备是广泛运用到制药产业中的岛津紫外分光光度计UV2600，测试对象为蛋白纯化过程中的产品样品。
选题意义
生物药生产往往时间短任务重，如何在最短的时间内把产品的数量质量提升，这就需要在各方面进行优化改进。在本人实习期间亲身经历了生物药生产下游工艺（主要为蛋白质纯化操作）的全过程，其中需要多次进行蛋白浓度的检测，以确保生产产品的稳定可靠。但按照实习公司内的SOP（标准操作规程）规定操作，通常耗时过长且测试结果不准确，通过优化方法可以更加准确测试蛋白浓度，或者使测试时间缩短，以此来提高生产效率。 紫外分光光度计仪器分析法广泛应用于工农业各部门和科学研究的各个领域中，它是利用物质分子吸收紫外可见光谱区辐射的一种仪器分析方法。其基本原理是依据朗伯·比尔定律，即光被透明介质吸收的比例与入射光的强度无关，光的吸收与吸收层厚度、溶液浓度、光吸收率成正比，可用下式表示：A=ktimes;btimes;c. （1）式（1）中：A 为吸光度；k 为摩尔吸光系数；b 为光程，即盛放溶液的液槽的透光厚度；c 为溶液浓度。
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