开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
课题背景：
胸腺肽alpha;1(Talpha;1)是1972年Goldstein等人发现的胸腺提取物第5 组份(TF5)中的一种成份, 是一种针对T 细胞的免疫增强剂，调节T 细胞的成熟、分化和功能。通过对其氨基酸序列的测定得知, Talpha;1 是由28 个氨基酸组成的酸性较强的多肽, N 端被乙酰化，分子量为3108 , 等电点为4.2 。体内及体外的活性测定结果表明, Talpha;1 的活性较TF5 高10 到1000 倍。成年人胸腺开始退化, 推测Talpha;1 在体内的合成也开始急剧减少, 临床用途广泛,是治疗原发性和继发性免疫缺陷病、急慢性病毒性肝炎、难治性肺结核、银屑病、支气管哮喘、类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮、以及辅助治疗白血病和恶性肿瘤等的有效生化药物, 还用于抗衰老。目前国内上市的此类药物主要来自于动物为原料的提取, 但存在步骤复杂、纯度不高、有副作用等欠缺,目前临床使用的Thyalpha;1 是采用化学合成制造, 生产成本较高，限制了它在临床中的应用。
正常人血清中IgG依其重链不同,可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4个亚类，IgG1的Fc片段由重链C端1/2组成，包含CH2和CH3两个功能区，分子量为50KD。生物学活性有：抗体分子选择性通过胚胎部位；补体活化部位；决定抗体分子的亲细胞性；抗体分子通过粘膜进入外分泌液；决定各类免疫球蛋白抗原特异性的部位。基因工程开发的全人源IgG1 型抗体药物结构与人体内存在的天然抗体构象非常接近, 因此降低诱发免疫原性反应风险。此外, 与单链抗体、融合抗体片段相比, 完整的IgG 样四聚体抗体具有完整的重链和轻链, 可以诱发较强的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用 (antibody-dependent cellular cytotoxicity,ADCC) 效应； 同时, 全人源IgG1 型抗体具有高特异性、高亲和力、体内半衰期长等特性, 可以发挥更大的生物活性。因此, 近几年来, 全人源及全长治疗性抗体药物在市场上显现出极强的市场竞争力。医学临床表明，IgG1 型抗体与人胸腺肽具有协调和互补作用，联合应用优于单独使用，具有更强的抗肿瘤功效。
将胸腺肽融合基因插入原核表达载体，转入感受态的宿主细胞或菌体，IPTG（异丙基-beta;-D硫代半乳糖苷）或乳糖诱导表达，超声破碎菌体，经SDS-PAGE鉴定目的蛋白。为优化目的蛋白的诱导表达条件，本实验利用正交试验法设计并进行了三组平行试验，分析温度、诱导剂种类、诱导时间对于蛋白表达水平的影响程度。
黑色素瘤B16细胞株是生长在C57BL/6小鼠耳根部皮肤的自发性肿瘤,此瘤株主要发生肺转移。运用黑色素瘤模型对肿瘤小鼠进行分期给药，病理学检查与监测，观察胸腺肽融合蛋白的体内抗肿瘤活性。
实验设计方案：
1、重组Talpha;1融合蛋白的获得
1.1 菌种活化
将含有pET28a质粒载体的 BL21大肠杆菌菌种转接到含有双抗（终浓度为Kan 50mu;g/mL、Amp50mu;g/mL）的30mL LB 液体培养基中，于37℃，200rpm摇床上培养12~14h。
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