开题报告
- 研究的问题
代谢组学是对生物或细胞内所有低相对分子质量(Da＜1000)代谢产物同时进行定性和定量分析的一门新学科，对生物体内所有代谢物进行定量分析， 并寻找代谢物与生理病理变化的相对关系的研究方式，它是以组群指标分析为基础， 以高通量检测和数据处理为手段。
代谢组学数据采集应用多种分析技术，其中核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance, NMR) 技术是当前代谢组学研究中的主要分析技术，它可快速、非破坏地对生物体液等复杂混合物进行检测，除此之外，它对样品的前处理也比较简单。NMR技术用于代谢组学研究，具有高效、重现性高及能迅速获得代谢轮廓等优点。但是，由于大多数氢原子的化学位移在12ppm以内，使得代谢物信号高度重叠，从而使代谢物信号相互遮盖，影响了代谢物结构确证；其次，对于一些微量的物质，由于其信号微小而模糊，即使不被遮挡，也很难被准确归属。因此采用HPLC技术对相应生物样品中代谢物进行适当的展开分离，然后进行NMR分析，可以简化NMR波谱图，不仅能富集微量代谢物，而且可区分易混淆的化合物，丰富了代谢组学研究手段，利于代谢物的鉴定。
确证代谢物结构是药代动力学研究的一个重要环节，是探讨药物代谢转化途径、研究代谢产物的药效或毒性、发现药物效应或毒性靶器官等研究的基础。在药物代谢物的结构鉴定中，高灵敏、高特异性LC-MS联用技术已得到广泛应用，成为微量物质分析的主要手段，但主要问题是该技术对物质结构的鉴定能力有限，结合NMR技术能更有效地确定化合物结构。
本课题以啮齿类动物中的大鼠为例，利用HPLC-NMR的联用技术，鉴定大鼠肝脏中的部分水溶性代谢物。
- 研究手段
（1）样品制备
用10mg/kg的3％戊巴比妥钠溶液麻醉大鼠后剖腹，腹主动脉取血后，切除肝脏，采集两叶肝脏样品（500mg）锡箔纸包好迅速放入液氮速冻， -80℃保存待测。
将储存于-80℃的动物肝脏融化后，称取0.5g肝脏，加入2ml甲醇（4ml/g），425mu;l蒸馏水（0.85ml/g），匀浆。再加入1ml氯仿（2ml/g）匀浆，然后再加入1ml氯仿（2ml/g）和1ml（2ml/g）蒸馏水匀浆。4℃静置15min后，4℃离心1000g，15min。分离上层为水溶性物质，冷冻干燥；下层为脂溶性物质，N2吹干。-20℃保存待测。
（2）HPLC实验
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