实验目的:
采用基因工程的原理,对细菌质粒进行改造、重新构建后，转移到宿主细胞中，随宿主细胞复制表达，最终表达出特异性的蛋白。本课题在于用分子生物学的方法和手段对CTSD的基因进行突变、质粒重组构建以及转化表达，以发现新的酶活性
研究手段:
DNA分子的切割与连接、核酸分子杂交、凝胶电泳、细胞转化、核酸序列分析、质粒的人工合成、定点突变和PCR扩增。
前期准备：
查阅相关文献，了解CTSD的发展现状和研究进展，制定具体的项目实施方案，了解相关的基因重组的技术和原理。
实验路线及方法：
从pcDNA3.1-his/myc载体中克隆出CTSD片段,通过DNA连接酶构建带有CTSD的T载体,转化大肠杆菌DH5alpha;，大量扩增,抽提质粒,双酶切鉴定。双酶加T载体，即目的载体，将目的片段定向克隆到目的载体中,转化大肠杆菌DH5alpha;，大量扩增，质粒小抽，双酶切鉴定，送测，鉴定插入位置及插入位置的正确性。大摇成功转化的含有目的片段载体的细菌，大量抽提质粒（除去内毒素）或者高浓度/高纯度质粒。转染Hela细胞以及Hek293细胞，免疫荧光测定 His-CTSD融合蛋白的表达部位，Western-blot鉴定His-CTSD蛋白分子量大小以及表达峰度。
所用到的实验步骤为：
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