研究背景
白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病，按照起病的急缓可以分为急性白血病和慢性白血病。慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia，CML）起病缓慢，早期时无明显的症状，多为血象异常和脾肿大。随着病情的发展，可出现乏力、低热、多汗等新陈代谢现象，病情可以稳定1-4年；之后进入加速期，迅速出现贫血等状况；继而进入急变期，可急变为AML或ALL，此时临床表现与急性白血病一样且治疗效果和预后情况比原发性急性白血病差，死亡率高。目前，常用伊马替尼来治疗，由瑞士诺华公司开发并上市销售的甲磺酸伊马替尼（imatinibmesylate）已成为CML 病人的首选治疗药物。尽管伊马替尼治疗CML疗效显著，但需长期坚持服药，且费用高昂，急变期患者多数会出现耐药而使其失效。有研究证明，伊马替尼只对患者体内部分分化的细胞有效果，对干细胞无效，所以伊马替尼只能延长患者的生存期却不能治愈。鉴于此，二代、三代的酪氨酸激酶抑制剂也被开发出来，用于解决伊马替尼耐药时无法发挥理想药效的情况。但是，二、三代的酪氨酸激酶抑制剂耐药情况也非常的严重。此外，还可以采取骨髓移植的方法来治疗CML，但是骨髓难以寻找并且价格非常昂贵，难以普及。因此，拓宽研究思路，研究新型的CML药物迫在眉睫。
研究目的及意义
汉黄芩素是中药黄芩中的一种有效活性成分，具有广泛的应用途径。在最近几年的研究中发现汉黄芩素具有广泛的抗肿瘤作用，具有多途径、多环节、多靶点的作用。因此，有关它的抗肿瘤机制，全世界有很多地区都在研究。在治疗白血病方面，来自德国癌症研究中心的weber 课题组于在2006年和2007年，在《blood》杂志上发表了两篇关于汉黄芩素抗白血病的文章，结果表明它可以优先杀死恶性淋巴细胞，并通过诱导PLC1和Ca2 依赖性的凋亡抑制T淋巴细胞肿瘤生长，还能联用TNF能诱导AML细胞凋亡而对正常细胞几乎没有毒性。汉黄芩素这种对恶性细胞的选择抑制，与分化诱导剂的作用较为相似，具有比较大的应用前景。
本实验将通过不同方面研究汉黄芩素对CML细胞的作用，包括抑制细胞增殖、诱导分化以及对分化相关信号通路的影响，为汉黄芩素正式用于CML的治疗提供相关的理论基础。本课题有利于促进汉黄芩素正式的药用化，缓解目前临床伊马替尼耐药患者的药物需求，具有较高的研究价值和临床意义。
研究内容
- 汉黄芩素体内外抗CML作用研究
- 汉黄芩素体内外诱导CML细胞红系分化的研究
- 汉黄芩素对CML细胞红系分化的分子机制研究
实验方案
- 汉黄芩素的红系分化诱导作用的检测
I联苯胺染色
成熟的红细胞内过氧化物酶能分解H2O2 ，从而释放氧气和氧化二氨基联苯
胺，形成黄色的不溶性沉淀。本实验通过联苯胺染色的方法检验CML细胞向红系 方向分化的能力。通过计数的办法计算出阳性细胞的比例。将联苯胺粉末配成2 mg/ml的储备液，4储备液避光保存，备用。收集细胞，PBS洗两遍，加入到6孔板 中。将联苯胺储备液每0.5 ml加入20 ml储备液每的过氧化氢混匀，配成联苯胺使用 液。将使用液与细胞悬液等体积混匀，3 min后，光镜下观察，蓝棕色的细胞为阳 性细胞。记200个细胞，计算阳性率。
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