开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
- 研究目的
从传统中药丹参中提取得到的丹参酮ⅡA,已被研究证明具有抗炎、抗氧化、调节细胞凋亡等作用,且在临床也有治疗心脑血管疾病、保护神经、抗肿瘤、调节免疫系统以及抗多脏器纤维化等多种用途。本课题首先对丹参酮ⅡA“能够増强单核细胞的吞噬功能和自然杀伤细胞的活性,能够通过抑制IL-1beta;等炎症介质的释放”方面的已有研究成果进行验证,同时给药丹参酮ⅡA,研究丹参酮ⅡA对LPS刺激产生的炎症表型的抑制作用。并进一步探究丹参酮ⅡA对琥珀酸脱氢酶(SDH)是否有抑制作用及其可能的信号通路,从而为药物治疗炎症提供新的思路。
- 拟研究或解决的问题
1.验证丹参酮ⅡA作用于巨噬细胞的抗炎作用;
2.测定与琥珀酸脱氢酶相关的所有基因和基因产物,探讨琥珀酸脱氢酶相关的调控网络;
3.探讨丹参酮ⅡA对琥珀酸脱氢酶调节的信号通路。
- 研究手段
- 在丹参酮ⅡA作用于巨噬细胞抗炎作用的验证中,通过文献查阅和总结课题组前期的实验情况,选择含血清培养基,生长繁殖旺盛的健康RAW264.7细胞,通过对照实验方法设计进行培养实验,设置空白组、模型组、样品组和阳性药组,收集上清,检测乳酸和活性氧。
- 进一步刺激巨噬细胞促炎后,检测验证促炎因子IL-1beta;分泌降低,抗炎因子IL-10分泌增加,HIF-1alpha;稳定的结果。
- 采用转录基因组学的方法,利用高通量测序技术对模型制备(LPS刺激)及采用丙二酸进行药物干预后的基因表达进行精度及准确的定量和定性研究,分析差异表达基因。测定与琥珀酸脱氢酶相关的所有基因和基因产物,探讨琥珀酸脱氢酶相关的调控网络。
- 对上述研究出的琥珀酸脱氢酶相关的调控基因,采用受试药物丹参酮ⅡA对琥珀酸脱氢酶调节的信号通路进行研究。
- 研究内容
1.给药RAW细胞的乳酸和活性氧含量变化;
2.给药RAW细胞的IL-1beta;、IL-10、HIF-1alpha;含量变化;
3.测定与琥珀酸脱氢酶相关的所有基因和基因产物,探讨琥珀酸脱氢酶相关的调控网络;
4.采用受试药物丹参酮ⅡA对琥珀酸脱氢酶调节的信号通路进行研究。
- 成果形式
成果将以基础研究论文的形式呈现。
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