拟研究和解决的问题:
为了评价及控制薏苡仁药材及饮片的质量,本项目拟采用性状鉴别、显微鉴别及薄层色谱鉴别对不同产地和市售商品薏苡仁药材及其饮片开展系统的鉴别研究,并对其质量进行比较及相关评价,旨在为薏苡仁药材及饮片的质量标准提高提供实验依据。
采用的研究手段:
本研究拟采用经典的性状鉴别、显微鉴别及薄层色谱鉴别技术对薏苡仁药材及饮片进行鉴别研究。
文献综述:
薏苡仁( Semen Coicis,Coix Seed) 俗称米仁、六谷子,又名薏仁、薏米、苡仁等,是单子叶禾本科植物薏苡(Coix lacryma-jobi L)干燥成熟的种子[1]。秋季果实成熟时采割植株,晒干,打下果实,再晒干,除去外壳黄褐色种皮和杂质,收集种仁。种仁宽卵形或长椭圆形,表面乳白色,光滑,偶有残存的黄褐色种皮。薏苡仁是常用的中药,又是普遍、常吃的食物,性凉,味甘淡、无毒,《本草纲目》中有这样的记载:薏苡仁能“健脾益胃,补肺清热,去风渗湿。炊饭食,治冷气。煎饮,利小便淋”[2] 。
中药薏苡仁中含有多种活性成分,主要包括薏苡仁酯类、甘油三酯类、甾醇类、酰胺类、糖类、多酚类等化合物。1961年,日本学者首次从薏苡仁中分离出薏苡仁酯并人工合成,认为是抗肿瘤的活性成分。通过TLC法、GC及GC-MS法分析,认为薏苡仁抗癌活性成分中油脂性的成分是甘油三酯,并测得平均相对分子质量870.97,脂肪酸残基为十六碳烷酸、十八碳烷酸、十八碳一烯酸、十八碳二烯酸[3]。目前共有 12 种甘油三酯得到了鉴定,其中含量大于3.0%有三亚油酸甘油酯、二亚油酸甘油酯、棕榈酸二亚油酸甘油酯、亚油酸二油酸甘油酯、棕榈酸亚油酸油酸甘油酯、三油酸甘油酯和棕榈酸二油酸甘油酯7种,总量占甘油三酯的90%以上。组成甘油三酯类成分的脂肪酸主要为棕榈酸、亚油酸、油酸和硬脂酸,其中硬脂酸含量较少[4]。烷醇类是由20-36个碳原子构成的脂肪族链状醇,主要有二十二烷醇、二十四烷醇、二十六烷醇,二十八烷醇等。植物甾醇以环戊烷多氢菲为基本结构,并含有醇基,故称为固醇类化合物。酰胺类主要有十六酰胺乙醇和脂肪酸酰胺。这些成分在种壳,种皮,种仁中含量含量差异较大[5]。庄玮婧等通过红外光谱并结合1H-NMR谱图并在HPLC和GC分离下显示薏米多糖由L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖和D-甘露糖6种单糖组成[6]。多酚类物质在薏苡仁中含量较多,Zhao, M等[7]从100g薏苡仁中提取到67mg的多酚物质,其中主要含有酚醇、酚醛、酚酸、木脂素类、黄酮类物质。这些成分也是过去十年的研究焦点。
在药理活性方面,薏苡仁主要有抗氧化,抗炎,免疫调节和抗癌作用。在抗氧化活性中多酚类起到主要的作用,而且对于薏苡仁用不同的提取溶剂和洗脱溶剂所得分离物的抗氧化活性有差异[8]。在免疫调节活性中多糖起到主要作用。苗明三等[ 9]通过实验证实薏苡仁多糖有改善红细胞和 T 淋巴细胞免疫功能的作用。而且薏苡仁多糖可浓度依赖性的增加小鼠巨噬细胞NO, IL-6 and TNF-a分泌[10]。NF-kB转录活动受阻是导致炎症反应的主要原因,在抗炎活性中,薏苡仁提取分离得到的的桔皮素,川皮苷,对羟基苯甲酸是主要的抗炎物质[11]。在抗肿瘤方面,酯类是首先被发现的具有抗肿瘤活性的成分,也是报道最多最受关注的化学成分。Chang等[ 12] 通过体内外药理实验研究发现薏苡仁提取物诱导人类胰腺癌细胞凋亡呈剂量和时间依赖性。李毓等[13] 运用移植性瘤淋巴裸鼠模型来观察薏苡仁酯对鼻咽癌转移的影响,发现薏苡仁酯抑制人鼻咽癌细胞CNE-2Z的转移具有剂量依赖性。Fei Yua等[14] 通过体外实验证实薏苡仁提取物可明显地抑制脂肪酸合成酶(FAS)的活性。
通过对薏苡仁各成分药理活性作用了解,对薏苡仁质量把控显得尤为重要。薄层色谱(Thin-layer Chromatography,TLC)法作为色谱法的一个分支,因其独具的设备简单、操作简便快捷、结果直观、兼具分离鉴定双重功能等长处而被广泛应用于药物分析特别是中药分析中。薄层色谱法的省时、低成本、检测手段多、信息来源多的优点是其它色谱技术不可比拟的[15]。
2015版《中国药典》对于薏苡仁的薄层鉴别在是在硅胶G薄层板上用三油酸甘油酯作为对照品,以石油醚(60〜90℃)-乙醚-冰醋酸(83:17:1)为展开剂,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰 [16]。而《欧洲药典》是在反向硅胶荧光板用三油酸甘油酯和油酸作为对照品,以二氯甲烷:冰醋酸:丙酮20:40:50为展开剂,100g/L磷酸乙醇溶液为显色剂。《日本药典》未进行薄层鉴别。各国对薏苡仁鉴别条件不一,因此本实验旨在通过薄层色谱对薏苡仁中甘油三脂类成分进行鉴别分析。为薏苡仁药材及饮片提供更优的鉴别方法。
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