题目：索拉非尼联合恩杂鲁胺对前列腺癌的体外药效学研究
背景：前列腺癌是指发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤。前列腺癌是一种雄激素依赖性恶性肿瘤。2012年我国肿瘤登记地区前列腺癌发病率为9.92/10万，列男性恶性肿瘤发病率的第6位。发病年龄在55岁前处于较低水平，55岁后逐渐升高，发病率随着年龄的增长而增长，高峰年龄是70～80岁。家族遗传型前列腺癌患者发病年龄稍早，年龄le;55岁的患者占43%。 恩杂鲁胺（enzalutamide）是一种口服雄激素受体拮抗剂，用于化疗后进展的转移性去势耐受前列腺癌的治疗，可延长患者生存期。基础研究证实可阻止细胞内的DNA转位和DNA聚合，并且无激动剂的活性。临床治疗12周后，57%未经化疗的CRPC患者PSA下降大于50%，曾接受化疗后的患者有45%出现PSA的下降，其Ⅲ期临床试验进一步验证了MDV3100在晚期CRPC患者的疗效和安全性。索拉非尼是一种多激酶抑制剂。临床前研究显示，索拉非尼能同时抑制多种存在于细胞内和细胞表面的激酶，包括RAF激酶、血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）、血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3）、血小板衍生生长因子受体－beta;（PDGFR－beta;）、KIT和FLT-3。由此可见，索拉非尼具有双重抗肿瘤效应，一方面，它可以通过抑制RAF/MEK/ERK信号传导通路，直接抑制肿瘤生长；另一方面，它又可通过抑制VEGFR和PDGFR而阻断肿瘤新生血管的形成，间接抑制肿瘤细胞的生长. 索拉非尼抑制去势抵抗性前列腺癌（CRPC）细胞雄激素受体（AR）表达和信号传导并诱导凋亡的实验结果，该试验采用前列腺癌细胞株（LNCaP）的CRPC亚系LNCaP-Bic和LNCaP-abl为研究对象，两种细胞系的AR和抗凋亡蛋白Mcl-1表达均升高，用索拉非尼处理后， 出现Mcl-1表达下调和AKT的去磷酸化，从而诱导细胞凋亡；同时索拉非尼也抑制AR mRNA的复制和蛋白表达。研究者认为，索拉非尼作为辅助用药联合去势治疗可能有利于控制前列腺癌的进展。
目的：观察索拉非尼联合恩杂鲁胺对前列腺癌细胞的抑制作用。
方法： 使用不同浓度索拉非尼联合恩杂鲁胺处理人前列腺癌LNcap细胞和DV145细胞。
1）以MTT法检测处理72h后 LNcap细胞和DU145细胞的抑制率。
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 或5400nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。其步骤包括铺板、 加药、呈色、 比色。做实验时应注意选择适当的细胞接种浓度、 血清浓度一般选用10%或以下的培养液进行实验，以降低实验本底，增加实验敏感性、 设置空白对照组。与试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照孔。其他实验步骤完全相同、最后比色时，以空白孔调零。
2）AnnexinV-F1TC/PI检测LNcap细胞调亡情况。
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。
AnnexinV是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V /PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V /PI ）。
3）以蛋白免疫印记试验检测处理24h后LNcap细胞内P-ERK，Bcl-2，AR蛋白的表达情况。
免疫印迹法是采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。其具体步骤如下：
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
