- 立题依据
红细胞膜作为一类生物包裹材料，与脂质体相比具有更低免疫原性，更长的体内循环保留时间，并且可通过嵌入靶向官能团而具有靶向性等特点。可以通过磷酸缓冲液多次洗涤离心，低渗碎膜离心的方式提取红细胞膜。现已研究的较成熟的技术是红细胞膜包裹聚乳酸- 羟基乙酸共聚物（PLGA），而现在我们所要面对并解决的是腺病毒载体和腺相关病毒载体的包裹问题。
目前所使用的病毒载体系统尚无同时具备低毒性、高效率、大容量、靶向感染的理想载体。而腺病毒载体具有高效传递和表达基因的能力，以其宿主范围广泛和对人体的低致病性、病毒颗粒比较稳定、基因组较少发生重排等优点被广泛应用于肿瘤基因治疗中。并且已有研究证实携带有肝细胞核因子4a（HNF4a）基因的重组腺病毒对鼠类肝细胞肝癌具有分化治疗的作用，但使用高滴度的腺病毒载体或逆转录病毒进行肝癌体内治疗常造成一定的肝功能损害。由于细胞的靶向性和宿主的免疫反应限制了腺病毒载体的应用和发展，其较强的免疫原性常可导致抗腺病毒中和抗体产生。中和抗体可迅速清除腺病毒载体,导致治疗基因消失。我们设想通过修饰腺病毒外表,以减少腺病毒的中和反应。而使用非病毒载体介导,虽然也能将目的基因导入细胞内,且具有安全、无毒、简便、可携带较大 DNA 分子等优点,不会引起机体对载体的免疫反应,可反复多次使用,但缺点是转染效率较低,缺乏细胞特异性。目前已有研究表明,将腺病毒载体和非病毒载体二者有机地结合起来,可以取得更好效果。我们希望结合病毒进入宿主细胞的能力和非病毒系统的安全性,所以开展了本研究。这些各种载体系统的相互结合,也许正是目前可以寄予最大希望的办法。现在比较成熟的是脂质体包裹腺病毒载体和腺相关病毒载体的技术和方法，而这次研究我们想对腺病毒载体进行另一种改进和完善，利用红细胞膜的包裹降低腺病毒载体和腺相关病毒载体免疫原性，延长体内保留时间，增加细胞靶向性。
- 拟解决的关键问题
本课题拟待解决的关键问题包括：红细胞膜是否成功包裹腺病毒载体和腺相关病毒载体的验证方法（红细胞膜包被腺病毒载体和腺相关病毒载体后的表征）、红细胞膜包裹腺病毒载体和腺相关病毒载体方法的探索和优化、红细胞膜包裹腺病毒载体和腺相关病毒载体不同方法的评价和比较（包括透射电子显微镜TEM观测物质形态和粒径，z电势的比较，RBC-Ad稳定性的比较，包封率和载病毒量的比较，腺病毒载体和腺相关病毒载体释放的药代动的比较）。
三． 研究方案
当准备完成这项课题之时，应做好文献查阅工作，系统调查、整理前人有关的研究成果，对资料加以分析，选择有用信息以供参考。可以参考腺病毒载体和腺相关病毒载体用脂质体等材料包裹的方法资料，或者根据红细胞膜作为膜包裹材料现有的研究和现有的实验条件选择合适的处理方式、合适的检测验证手段，不断优化红细胞膜包裹腺病毒载体和腺相关病毒载体的方法。
- 红细胞膜的制备
红细胞膜的制备方法已有一套较为成熟的技术，详见文献⑴所述。
- 红细胞膜成功包裹腺病毒载体和腺相关病毒载体的验证方法
查阅红细胞膜作为包裹材料包裹聚乳酸- 羟基乙酸共聚物（PLGA）等聚合物的相关文献的研究，引用其中的包裹方法并进行相关表征验证。通过透射电子显微镜（TEM）观测物质形态和粒径。通过荧光免疫法分别给红细胞膜和腺病毒载体荧光标记，然后观测荧光的位置。通过梯度离心进行分离后再观测。其他方法有待通过更多的文献查阅和实践尝试得出。
- 红细胞膜包裹腺病毒载体和腺相关病毒载体的方法的评价，比较和优化
对于不同方法包裹后腺病毒载体进行粒径，z电势的测量和比较，并对其稳定性，包封率，载病毒量和释放病毒的体外动力学进行研究和比较。对红细胞膜与腺病毒载体和腺相关病毒载体最佳比例的优化。
参考文献：
[1] Che-Ming J. Hu, Li Zhang, Santosh Aryal, Connie Cheung, Ronnie H. Fang, and Liangfang Zhang（2011）Erythrocyte membrane-camouflaged polymeric nanoparticles as a biomimetic delivery platform. PNAS July 5, 2011 ,108, 10981-27
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
