开题报告
国内外研究均显示,教师、商人和儿童等用声过多人群中慢性炎症性喉病的发病较高。西医对该病的治疗多采用声休、发声训练、抗生素与激素雾化吸入或手术等疗法,副作用大。而中药复方由于其多途径、多靶位、多层次的药理作用对治疗此类疾病有着独特的优势,具有广阔的开发前景。但中药复方本身也有着质量控制标准不一, 方中药物交互作用难以研究等亟待解决的问题。因此,要想更充分的发挥中药这一领域的作用,不仅要深化对疾病的认识,而且要提高科研水平,加大对新药的研发投入。
本课题主要研究该中药复方提取物治疗嗓子疾病的镇痛,祛痰,镇咳,抗炎的功效。
根据江西省中医学院陈奇教授主编的《中药药理研究方法学》第三版及李仪奎主编的《中药药理实验方法学》第二版以及魏伟,吴希美,李元建编写的《药理实验方法学》第四版。
研究化痰功效常用气管段酚红法,根据酚红部分地从气管分泌排出,从小鼠气管段中排泌的酚红量,确定药物的祛痰效果。本法简单易行,不需要特殊仪器装置,在一定程度上反映了支气管分泌情况,但是影响肾功能的药物易得到假阳性结果,此法不能用同一只动物做给药前后的比较,所得误差较大,因此本法也只适用于初筛。
有时也会采用小鼠呼吸道酚红冲洗法,用碳酸氢钠溶液将呼吸道内排泌的酚红洗出,根据酚红量反映药物的化痰效力,若药物影响酚红排泄而使其30分钟时血中仍高浓度,高渗碳酸氢钠溶液5%,反复抽洗呼吸道时,血液中酚红讲被动渗出而造成假阳性,故应采用处死前放血,用生理盐水冲洗后碱化显色的方法;
研究抗炎作用常用小鼠耳肿胀法,用致炎剂二甲苯或2%巴豆油引起耳壳皮肤肿胀后,观察并测定给药组与对照组致炎耳壳的重量,并比较它肿胀率的差异。本法操作简便,不需特殊仪器,见效快,用药量少,适用于抗炎药的筛选。实验中应注意:1.取下的耳片应与涂致炎药的部位相吻合。2.受试药物以全身给药更为合理,局部涂药影响因素较多,可能会出现假阳性。
也常用大鼠足跖浮肿法,用一定量的致炎剂,注入大鼠后肢足跖或踝部皮下,造成足跖和关节肿胀,然后测定足跖或关节周长,宽度或整个足跖,踝关节的容积,比较给药组和对照组足跖或踝关节肿胀抑制率。【肿胀率(%)=(致炎后足跖容积-致炎前足跖容积)/致炎前足跖容积】。本法是目前最常用的筛选抗炎药物的方法,因本法形成的炎症模型可靠,药物抗炎效果可做定量测定,且大鼠易于得到。致炎剂中以角叉菜(carragenin)应用最广,因其引起的模型具有差异性小,敏感性和重现性高等优点。在实验过程中应注意:1.致炎剂若要注入足跖皮下,应将动物后肢拉直,针头刺入足跖中部皮下先向上注射一部分,再调转针头向下注完(共0.1ml)。2.每次测定的部位要固定,测足跖或踝关节的记号线必须与玻管标记线一致。
研究中药的镇痛作用最常用小鼠热板法,将小鼠放到预先加热到55℃左右的金属板上,以舔后足作为疼痛反应指标。观察给药前后痛阈值的变化。该方法操作简便易行,痛感指标明确,对动物组织损伤最小,动物可反复利用,但对作用较弱的镇痛药不敏感。在实验中应注意1.根据动物体重,基础痛阈值进行筛选,否则会影响实验结果。2.雄性小鼠因阴囊受热后易松弛,与热板接触而致反应过敏,因此应选用雌性小鼠。3.室温对小鼠有影响,过低小鼠反应迟钝,过高则敏感易引起跳跃,13~18℃小鼠反应波动最小。
也常用小鼠扭体法来判断药物的镇痛效果。小鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.1ml/10g(或0.05%酒石酸锑钾0.1ml/10g),由于刺激腹膜引起较大面积较长时间的炎性疼痛,产生扭体反应,表现为腹部收缩内陷,躯体扭曲,后肢伸展及蠕动等,在注射化学物质15min内出现频率较高。镇痛药可抑制这种反应。本法敏感,简便,重复性好,适用于筛选弱镇痛药,缺点是难以对动物进行时效分析,动物用量大,缺乏特异性,干扰因素多,必须辅以其他实验佐证。
镇咳实验最常用的是采用小鼠氨水引咳法通过氨水刺激小鼠呼吸道感受器引起咳嗽,统计各组小鼠咳嗽潜伏期及2min内咳嗽次数来观察药物的镇咳作用。本法简便,不需复杂贵重的仪器,国内比较常用。实验时应注意:观察小鼠的咳嗽动作必须仔细。以小鼠腹肌收缩或缩胸,同时张大嘴,有时有咳声,算作1次咳嗽。实验时最好将各个实验组平行进行。
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