一、研究背景
灵芝，又称仙草，为担子菌纲多孔菌科真菌赤芝和紫芝的干燥子实体，是一种资源丰富应用历史悠久的药用真菌，具备很高的药用价值。灵芝孢子是灵芝的生殖细胞，具有灵芝的全部遗传活性物质。灵芝孢子油是灵芝孢子有效成分的集合体，含有多种活性成分[1-3]。但是，因为提取工艺的不同，灵芝孢子油脂肪酸组分的组成尚不清楚。
目前，灵芝孢子油的提取方法主要有索氏提取法、超临界CO2萃取法、微波提取法以及超声波提取法[4]。其中，超临界CO2萃取法凭借无污染、工艺简单以及能够保护萃取物生物活性等优点脱颖而出，成为获取灵芝孢子油最有效的途径之一。超临界CO2萃取法是利用压力和温度对超临界CO2溶解能力的影响而实现对组分的分离，使得分离过程中压力的不同或温度的变化均会导致所得产品组分组成的变化。因此，建立超临界CO2萃取灵芝孢子油脂肪酸组分组成的分析方法非常重要。
目前，已有部分关于油类物质脂肪酸组分组成的研究。徐伟东等[5]采用气相色谱法并与大豆油标准品比较，分析鉴定了大豆油中包括软脂酸在内的5中脂肪酸组分；李英霞等[6]将苏子油甲酯化，采用气相色谱法分析，通过与标准品比较，分析了苏子油中的亚麻酸及油酸组分；陈业高等[7]将石榴籽油甲酯化，利用GC-MS分析了包括硬脂酸在内的7种脂肪酸组分；Lee DS等[8]通过皂化及甲酯化处理，结合GC-MS分析了大豆油等8种植物油中包括油酸在内的5种脂肪酸组分。在这些研究中，利用气相色谱法分析脂肪酸组分需要使用标准品；采用GC-MS直接分析油类物质中脂肪酸组分，因为不皂化物组分的存在而使结果出现偏差。
研究表明灵芝孢子油具有抗肿瘤、抗衰老、调节人体免疫功能等临床价值。卞嵩等[9]研究表明灵芝孢子油对H22移植性癌细胞生长有抑制作用,可降低瘤细胞中血管生成调控基因VEGF的表达；易友金等[10]用灵芝孢子油处理衰老模型小鼠，发现其具有抗氧化功能；易友金等[11]研究发现灵芝孢子油可通过增强细胞因子的分泌、表达进行免疫调节。而一般认为灵芝孢子油的临床作用与其含有丰富的脂肪酸有密切的关系，但是这些研究均是以灵芝孢子油处理，并未阐明灵芝孢子油脂肪酸组分与这些活性的关系。
本课题拟采用皂化反应分离灵芝孢子油脂肪酸组分，经过甲酯化处理后，GC-MS分析脂肪酸组分的组成。通过细胞实验研究灵芝孢子油脂肪酸组分的抗氧化活性。
二、研究目的、意义
本课题研究旨在建立超临界CO2萃取灵芝孢子油脂肪酸组分分析系统。在明确灵芝孢子油脂肪酸组分组成的基础上，分离灵芝孢子油脂肪酸组分，并分析其抗氧化活性。
三、实验内容
1.灵芝孢子油皂化反应条件的确定
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