一．拟研究的问题：幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori, 简称Hp)是慢性胃炎和消化性胃溃疡等疾病的重要致病因子，与胃癌发生紧密相关。
胃癌是我国第二大癌症，Hp作为主要诱因之一，在我国感染率达到近50%。
非基因修饰的乳酸乳球菌粒子(GEM)安全性良好、粒径符合肠道派尔淋巴结摄取的范围，可作为口服亚单位疫苗的有效黏膜佐剂。
粘附素HpaA是幽门螺杆菌粘附素的一种，其在幽门螺杆菌分离株中的表达高度保守且与其他已知蛋白没有显著的序列同源性，另外HpaA具有较好的免疫原性和免疫刺激作用，所以HpaA可以作为重组疫苗的候选抗原。
本研究根据机体抗幽门螺杆菌感染的免疫保护机制和表位疫苗的构建理论，筛选优势抗原表位，以GEM粒子为佐剂设计一种具有科学合理结构的Hp黏附素疫苗。
二．实验主要内容：本实验的研究包括以下几项内容:1. 筛选幽门螺杆菌黏附素优势抗原表位2. 制备GEM粒子3. 重组克隆质粒pUC-BCG的构建4. 重组克隆质粒pETCBCG的构建5. 蛋白表达形式的鉴定6. Ni-Agarose His标签蛋白纯化及纯度分析7. 重组纯化蛋白的透析复性、浓缩和浓度测定三．实验方法：1. 筛选幽门螺杆菌黏附素优势抗原表位通过查阅文献，选用幽门螺杆菌多种候选抗原构建多价表位疫苗。
利用IEDB在线数据库分别筛选出B细胞优势抗原表位和T细胞优势抗原表位，RANKPEP生物信息学软件对表位肽的连接顺序、Linker、拷贝数和分子内佐剂加以分析和评价，用DNAstar等软件分析疫苗理化性质、空间结构等，设计出幽门螺杆菌黏附素疫苗的结构。
2. 制备GEM粒子培养乳酸乳球菌，用0.5体积的1PBS洗涤一次，10%三氯乙酸（TCA）重悬，沸水浴30min。
12000rpm离心10min去掉上清液，1PBS洗涤三次后，用适量的磷酸盐缓冲液重悬，得到GEM粒子。
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