动植物生命体在有氧代谢过程中会产生各种活性氧[[[] 张鑫. 细胞中活性氧的荧光探针检测法研究进展 .现代预防医学 2010,(37),22.]]Reactive Oxidative Species,ROS)。
ROS是指生物体内与氧代谢有关的含氧自由基和不以自由基形式存在的具有高活性的中间产物,主要由氧化呼吸链中的酶复合体Ⅰ和Ⅲ漏出的电子产生,包括超氧阴离子(O2 -),羟自由基 (HO),过氧化氢 (H2O2),一氧化氮(NO),单线态氧(1O2),次氯酸(HOCl),过氧亚硝基阴离子(ONOO-)等 ,这些活性氧与细胞的增殖、分化、凋亡以及重大疾病的发生、发展、迁移等生命活动过程密切相关。
但是由于ROS性质活泼, 在体内代谢迅速, 而生物体内多种抗氧化物的存在都给 ROS 的测定带来一定难度。
因此,寻找灵敏有效的 ROS 检测方法已成为研究其生物学作用的关键。
目前,已经建立的测定活性氧自由基方法,主要有电子自旋共振法(ESR)[[[] .Armstead W M,Mirro R,Busija D W,Leffler C W.Postichemic generation of super oxide anion by newborn pig brain [J]Am J Physiol.1988,255(2):H401-403]]、电化学方法、荧光检测技术、光电显微术[[[] .Li B,Gutierrez P L, Blough N V. Trace determination of hydroxyl radical in biological systems[J]. Anal. Chem. 1997, 69(21): 4295-4302. ]]及化学发光法[[[] 3.Chang M Y, Pralle A, Isacoff E Y, Chang C J. A selective, cell-permeable optical probe for hydrogen peroxide in living cells[J]. J. Am. Chem. Soc. 2004, 126(47): 15392-15393. ]]。
由于生物样品中的水分会严重干扰电子自旋共振法检测的灵敏度及细胞内多种带电离子对电化学测定的干扰,使电子自旋共振法及电化学测定自由基的方法无法应用于细胞内的测定。
化学发光法选择性差,也不适用于低浓度的多种自由基的同时检测。
光电显微术能够用于观察各种染色、非染色和荧光标记的组织和细胞等,但受质量检测高的限制、难以定量检测低浓度的活性氧自由基。
上述问题的存在与不足迫使人们寻找更高效、灵敏操作方便的检测方法。
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