一种固相合成线性多肽的纯化及分析文献综述

 2021-09-25 20:42:30

毕业论文课题相关文献综述

文 献 综 述

1.肽的简介

肽是由氨基酸组成的、蛋白质结构与功能片段。通过氨基酸的排列顺序不同,从而使蛋白质具有数以千万计的生理功能。由2个氨基酸脱水缩合而成的肽叫二肽,由此类推,依据其氨基酸组成数目可人为将2~5个氨基酸组成的肽称短肽,6~16个氨基酸组成的肽叫多肽[1],17 个以上的氨基酸组成的叫蛋白质。多肽在自然界中广泛存在,并且生物活性多肽具有免疫调节、激素调节、酶调节、抗病毒、抗氧化、降血压和降血脂等功能[2-5]

2.分离方法及研究进展

2.1高效液相色谱(HPLC)

高效液相色谱法引用了气相色谱的理论, 用高压输送流动相,它的色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成。柱后连有高灵敏度的检测器,可对流出物进行连续检测。按固定相的性质可分为离子交换液相色谱、反相高效液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型[6]

2.1.1离子交换色谱 (IEXC)

离子交换色谱的主要原理是依据物质的带电性质、带电数量的不同而进行分析的。这种技术具有分辨率高、工作量大、耐酸碱性好、易于操作的特点。Wu[7]等利用离子交换柱层析法,探讨分离牛碳酸酐酶异构体和牛血清白蛋白、鸡血清白蛋白酶的提取条件,从而获得了有价值的相关数据。刘璇[8]等通过强阳离子交换色谱,调节pH 和离子强度,从苦瓜籽中分离一种活性多肽。尽管如此,在使用离子交换色谱时,不但在分离过程中易受到pH、分子量大小、离子强度以及盐浓度的影响,而且存在试验材料昂贵、再生性比较差、分离速度慢、分离纯化范围小、浓度高无法检测等缺点。

2.1.2反相高效液相色谱(RP-HPLC)

反相高效液相色谱是以液体为流动相的色谱技术,具有高灵敏度、高压、高速,柱子可以反复使用,分离效果较好,比较稳定、回收方便等特点。此外,反相高效液相色谱还具有溶解能力大,色谱柱效较高,分离能力强,保留机理清晰的优点。这些优点是对肽易受介质的pH值、外界温度、有机溶剂性质影响的这一缺点的良好解决办法。杨化新 [9]等通过反相高效液相色谱法,利用C18柱检测了重组人生长激素的肽片断,最终成功得到了人生长激素特征性胰肽图谱。Hartwick 等曾通过反相液相色谱监测腺苷的浓度,从而确定了红血球中腺苷脱氨酶的活性,利用类似的方法,相关人员还测定了3-AMP 合成酶、磷酸核糖焦磷酸合成酶、黄嘌呤氧化酶等的活性, 表现出反相液相色谱在这一领域的巨大潜力。反相高效液相色谱在使用时也受到柱子和使用条件的影响。

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