一、课题背景
罗格列酮为第二代噻唑烷酮类降血糖新药,是一种高选择性过氧化酶体增殖活化受体gamma;(PPARgamma;)激动剂。其作用机制是通过与PPARgamma;结合,激活脂肪、骨骼肌和肝脏等胰岛素所作用组织的PPARgamma;,增加多种蛋白质的合成,调节胰岛素应答基因的转录,控制血糖的生成、转运和利用，是一种有效的胰岛素增敏剂。罗格列酮具有药效作用强,肝脏副作用小和生物利用度高的优点。
人体内代谢药物的主要酶是细胞色素P450超家族（CYP），它们是一类主要存在于肝脏、肠道中的单加氧酶，多位于细胞内质网上，催化多种内、外源物质的（包括大多数临床药物）代谢。CYP有多个亚家族，包括CYP3A4，CYP3A5, CYP2D6，CYP2C9，CYP2C19等。体外研究表明，罗格列酮主要经P450同功酶CYP2C8代谢，经CYP2C9代谢仅占很小部分。其在体内经肝脏代谢失活，几乎无原型药物排出，主要代谢产物为N-脱甲基、吡啶环3-或5-羟基化产物，以及它们的硫酸、葡萄糖醛酸结合物。
- 要解决的问题
罗格列酮是CYP2C8的体内典型底物，常用于药物与CYP2C8酶之间的体内药物相互作用研究，其样品预处理操作复杂，成本高，血药浓度测定需有专属、灵敏、准确的分析方法，本课题将建立测定大鼠血浆中罗格列酮浓度的高效液相色谱分析方法，根据血浆中罗格列酮浓度，计算其药动学参数，评价其体内过程，为探究新药或候选药物对CYP2C8酶的影响提供可靠的研究方法基础。
- 可行性分析
高效液相色谱法是将试样注入色谱柱的前沿，借助流动相送入柱内，通过试样中不同组分在固定相和流动相间物理作用的差异达到分离，并从色谱柱后沿先后洗脱。高效液相色谱法具有分离程度高、分离模式多样、应用范围广、分析速度快、检测灵敏度高、能与多种技术联用等特点，特别适合具有复杂基质的体内生物样品中的药物及其代谢物、内源性物质等的分析。在体内生物样品分析中，最常用的HPLC是RP-HPLC，其以极低极性或非极性的化学键合相作为色谱柱填料，极性较大的系统作为流动相，具有分析时间短、样品处理简单、适用范围广的优点。本课题需分析血浆样品中碱性药物罗格列酮的含量，故选用RP-HPLC法进行分析，并建立合适的色谱条件。
在流动相的选择过程中，参考多篇文献并进行改进，选用 0.02mol·L -1 醋酸铵 ( pH = 6.0) ：乙腈= ( 50∶50) 为流动相，可获得较好的分离效果，血浆中杂质对其无干扰。为提高分析结果的准确度，消除操作条件等的变化所引起的误差，选择睾酮作为内标物。罗格列酮的前处理应选择合适的提取溶剂，选择过程中,对比了乙醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯,结果表明氯仿提取效果不佳,乙醚适中,二氯甲烷及乙酸乙酯2种溶剂对罗格列酮均有比较高的提取回收率,但血浆的二氯甲烷提取物的色谱中干扰峰较多,影响测定,故最终选择乙酸乙酯作为提取溶剂。
在上述条件下，取大鼠血浆，预处理后制成的样品溶液进样，分析该方法的专属性；建立标准曲线，用加权最小二乘法进行回归运算，求得直线回归方程，根据当日的回归方程求得该浓度的日间精密度，确定最低检测浓度；计算本法的精密度与准确度；处理回收率。
根据大鼠血浆中罗格列酮的浓度，采用药物代谢动力学模型，计算其药动学参数。
- 研究方法和内容
- 选择合适的大鼠血浆中罗格列酮浓度的高效液相色谱条件。
- 建立合适的样品处理方法。
- 进行方法学验证。
- 根据大鼠血浆中罗格列酮浓度，计算其药动学参数，评价其体内过程。
- 工作计划
2月28日—3月20日：完成文献查阅、开题报告等前期工作。
3月21日—5月10日：完成相关实验操作，数据处理等工作。
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