1、选题背景
随着RNAi现象的发现及其应用技术的飞速发展，siRNA和反义核酸作为基因药物具有其独特的优势和巨大的潜力，它们可以在基因水平上直接抑制靶mRNA,更为高效和专一的沉默相关靶蛋白，然而，寡核苷酸具有稳定性差、难以透过细胞膜等缺点，为考虑能够安全高效地将其运输至靶点，学者们构建了多种载体系统，促进寡核苷酸的递送以发挥其沉默效应。
因为所在课题组前期设计并合成了一类具有较低材料毒性的碱基脂质分子，生物兼容性
较好，前期实验证实该类材料能够实现对简单DNA单链的包载递送，但在双链siRNA的转染方面并没有表现出较好的活性。所在课题组前期对阳离子脂材CLD包载pp-siRNA进行了研究，可与3rsquo;,3”-PP-siRNA形成静电、疏水双重作用，增大了PP-siRNA的包载效率，改善了纳米颗粒入胞途径问题。但是CLD具有阳离子材料的通性缺陷，即材料毒性较大。因此本课题尝试利用该碱基脂质分子DNCA作为辅助材料，完善阳离子脂材CLD对 3rsquo;，3”-pp-siRNA进行的包载递送。通过前期一系列的体外试验，发现该复合脂质体可有效地递送pp-siRNA,在降低了阳高干材料毒性的同时，基本保持原有的细胞摄取量、靶mRNA的抑制作用，并对纳米颗粒入胞途径进行了微调，实现了阳离子脂质体用于递送pp-siRNA的处方优化。
本课题对该碱基中性载体材料转染反义核酸做了进一步的探究MAPK信号转导通路是细胞内最重要的信号通路之一，而其中BRAF是这条通路重要的转录因子。在黑色素瘤中，BRAF有极高的突变率，其中主要的突变是BRAF基因外显子15的第1799位核苷酸T突变为A, 导致其编码的缬氨酸被谷氨酸取代 (V600EBRAF)，这一突变使肿瘤细胞中MEK-REK通路持续性激活，促进细胞增殖、凋亡抵抗和肿瘤侵袭转移。设计针对V600EBRAF的siRNA，抑制突变基因的表达，是黑色素瘤的有效疗法。
天然的siRNA是dsRNA在胞内被Dicer成21-25mer的RNA，通常会有5rsquo;磷酸基和3rsquo;羟基。合成的siRNA的5rsquo;羟基会在胞内被Clp1细胞激酶迅速磷酸化，这也是siRNA发挥活性的必要因素，因为siRNA只有在5rsquo;磷酸化后，才可以进入RISC发挥其基因沉默活性。
2、国内外研究现状
所在课题组曾报道，在siRNA antisense 5rsquo;端使用D/L-异核苷或LNA修饰会降低siRNA antisense链的活性，可能是因为改变siRNA 5rsquo;末端构象，使其结合RISC复合物及靶mRNA的能力减弱。而将siMB3序列antisense 5rsquo;端A碱基替换为C碱基（相应的sense 3rsquo;端U碱基替换为G碱基）后，其血清稳定性有了显著提高。由此可见，antisense 5rsquo;端修饰虽然会降低活性，但是具有提高其稳定性等优势，Harborth et al、Chen et al. 对5rsquo;端修饰对活性的影响持有不同意见。课题组其他工作报道了在siRNA 3rsquo;,3rsquo;rsquo;双缀合六肽KALLAL在细胞及动物水平上均表现出了较好的活性，另外，3rsquo;,3rsquo;rsquo;双缀合cRGD也在血清稳定性及细胞摄取等细胞水平也有优秀的表现。
XuJing等人利用DOTAP作为阳离子脂质，DOPE作为中性辅助脂质，成功研制出了RNA复制子疫苗87.Yoshie Maitani等人制备了DC一 CHOL和DOPE的混合处方用于基因转染，对比了1:2和3:2两种摩尔比混合方式，发现1：2混合具有很好的基因转染效果。0liviera等人将中性脂质甘油单油酸酯辅以 DDAB共递送slRNA,该处方具有较低的毒性，同时实现了较好的基因沉默效果. 阳离子脂材的其他修饰方法，例如对阳离子脂质体进行PEG的扦插，可以有效地降低内皮系统的吸收，增加体内长循环92。在2006年，Santel等人发展了一种新型的阳离子脂质体处方，该处方包含中性膜融合成分以及PEG修饰，以提高细胞摄取及更 有效的核酸释放能力。
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