一、实验背景
自1983年Cuello首次提出双特异性抗体的概念以来，目前全球已有3个双特异性抗体药物上市，至少125个双特异抗体药物进入临床研究，成为临床候选药物，其中以CrossMab技术为基础的双特性抗体药物至少为5个，约占4%，而针对TNF-alpha;与PD-1两个靶点的双特异性抗体药物尚未见报道。
CrossMab双特异性抗体其恒定区的基因序列是保持不变的，一旦完成对恒定区的改造，便可以根据需要将两种不同抗体构建成一种双特异型抗体。本课题利用重叠-延伸PCR技术构建CrossMab双特异性抗体的技术平台，为共靶向TNF-alpha;与PD-1 CrossMab双特异抗体研制奠定基础。实验中将对Anti-TNF-alpha;/PD-1 CrossMab双特异抗体进行纯化以及结构完整性验证，为基于该技术平台制备其他新型抗体药物奠定基础。
二、实验目的和意义
本课题将基于CrossMab技术平台，以本实验室已具备的TNF-alpha;和PD-1抗体序列为基础，构建Anti-TNF-alpha;/PD-1 CrossMab双特异抗体全基因序列，并通过哺乳动物细胞悬浮转染表达Anti-TNF-alpha;/PD-1 CrossMab双特异抗体，之后对此双特异性抗体进行纯化及鉴定，为进一步开发以CrossMab技术为基础的创新型结构及创新型靶点的抗体药物奠定基础。
三、技术路线图
基因合成Anti-TNF-alpha;/PD-1 CrossMab双特异抗体序列
目的基因与载体连接
重组质粒转染293F细胞
亲和层析纯化表达产物
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