春兰CgWRKY24基因的
克隆及序列分析
文献综述
春兰介绍
春兰，学名（Cymbidium goeringii.）是兰科兰属地生植物，别名草兰、山兰、朵朵香,花单生，少数两朵，花直径3-4cm，花期2-3月。春兰，被尊为花中“四君子”之一，也是我国传统的十大名花之一，深受广大栽植者喜爱，主要产于我国的江浙地区，其他地区如赣、皖、湘、鄂和云、贵、川等地也有产出。春兰在我国有着悠久的栽种历史，多在室内盆栽作观赏用，香气宜人；此外，香兰还具有药用功能，根，叶，花可入药，对治疗神经衰弱、阴虚、跌打损伤、咳嗽有一定功效[1]。
春兰的繁殖问题一直是研究领域广受关注的问题。传统的繁殖方式为分株繁殖，但是由于其育种周期长，繁殖率低下，繁殖周期饱受诟病。而兰花优良品种的获得主要以有性繁殖方式获得种苗[2]。
植物基因工程
植物基因工程技术指用人工的方法将特定的目的基因分离，利用载体、媒体等方法将分离的目的基因导入植物细胞受体，整合到植物受体细胞的染色体，让基因在植物受体中表达，来达到培育新品种与改变性状的目的。随着近年来植物基因工程的飞速发展，目前已形成了一整套较为成熟的植物基因转化技术内容包括：目的基因分离和鉴定、植物表达载体的构建、植物细胞的遗传转化、转化植物细胞的筛选及转基因植物的鉴定以及外源基因表达的检测等[3]。上述兰花繁殖存在的种种问题，需要通过植物基因工程来解决。同时兰花病毒也是兰花产业的大敌，抗兰花病毒基因工程的研究，目前的研究主要集中在利用病毒来源基因介导的抗性策略上[4]。基因工程是培育花卉新品种的重要方法，也为兰花的品种改良扩充了新的思路。
Kuehnle[5]等通过基因枪法轰击石斛兰原球茎，并进行21个月的卡那霉素选择，结果获得了经PCR和smthern印迹的含新霉素和番木瓜环状病毒包农蛋白基因的转化植株。台湾的Li-jen Liao等[6]将包含Cym-MV-CP-cDNA、玉米泛素启动子及neo终止子的DNA组件，通过粒子轰击转入兰花中，并且通过Soutern blot实验证明了CP基因成功整合。Yang等成功地克隆了蕙兰花叶病毒外壳蛋白基因，用电子枪轰击法将这一基因导入兰花的原球茎和愈伤组织，得到了较高的转化表达[7]。不难看出，分子生物技术的迅速发展和基因工程技术的应用促进了春兰的品种改良，给春兰育种提供了新思路、新方法、新途径[8]。
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- WRKY转录因子
植物的生长与基因调控息息相关，转录因子则是基因调控中重要的一环。
转录因子(transcription factor)是一群能与基因5`端上游特定序列专一性结合，从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。转录因子的四个功能区分别为DNA结合域（DNA binding domain）、转录调控域（Transcription regulation domain）、寡聚化位点（Oligomerization Site）和核定位信号区（Nuclear localization signal）。
转录因子已经成为现在生物学研究领域的热点，其功能分析是重要的研究内容之一。通过转录因子注释或表达量聚类分析，我们可以筛选出植物学问题过程中起主要调控作用的一些转录因子。
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